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Glycotech  协议 1

微量分离纯化方法

Stephan Ladisch~国家儿童医学中心癌症和移植生物学中心主任，华盛顿特区，22010

这种溶剂分配方法允许从小样品和浓度低的样品中分离，特别是相对于潜在污染蛋白质和其他大分子量物质的浓度而言。

协议 2

使用抗抗体的免疫组织化学

Tadashi Tai~ 东京都医学研究所肿瘤免疫学系主任，日本东京

使用与二抗偶联的免疫荧光的间接方法是一种相对简单、快速和容易的免疫组织化学方法。除了细胞内和细胞外抗原外，它适合研究膜抗原，并可应用于冷冻组织切片、悬浮细胞以及附着在载玻片或盖玻片上的细胞。

协议 3

使用糖苷内切酶对糖蛋白进行去糖基化

TH Plummer, Jr. 和 AL Tarentino，纽约州卫生部生物化学系，Wadsworth 实验室和研究中心，纽约州奥尔巴尼 12201

去糖基化的参数随每种糖蛋白而变化，并且必须凭经验确定(Methods in Enzymology, 1994, 230 : 44-57) 。人转铁蛋白是包含两条天冬酰胺连接的-岩藻糖基-双触角链的糖蛋白的一个例子，即使在 SDS 中变性后，其中一条也仅由内切糖苷酶缓慢释放。描述了对人转铁蛋白的典型测试反应。

协议 4

基于 ELISA 的敏感糖基转移酶测定

Bruce A. Macher~旧金山州立大学化学和生物化学教授，加利福尼亚州旧金山 94132

该程序允许使用基于ELISA的程序和碳水化合物特异性单克隆抗体检测和量化糖基转移酶活性。该程序避免了使用放射性标记的底物，并提供了一种检测特定产品的方法。

议定书 5

糖脂的免疫染色薄层色谱图

John L. Magnani~GlycoTech Corporation, 罗克维尔, 马里兰 20850

免疫染色薄层色谱图可以非常灵敏地检测蛋白质受体的功能活性碳水化合物配体。在糖脂中检测到这些碳水化合物结构，这些糖脂来自从相关目标组织中提取的分子的复杂混合物。可以分析的一些蛋白质受体是：抗体、嵌合 Ig 蛋白、凝集素、选择素、毒素和其他碳水化合物结合蛋白。

议定书 6

高效液相亲和色谱法分析寡糖配体

WeiTong Wang~GlycoTech Corporation, Rockville, Maryland 20850

高效液相亲和层析 (HPLAC) 是研究碳水化合物结合蛋白与其配体之间相互作用的有用技术。HPLAC 的主要应用之一是从复杂的生物混合物中筛选和分离天然配体，例如检测、纯化和确定体液中碳水化合物配体的结合常数。通过提供快速、灵敏和简单的 K D值测定方法，HPLAC 还可用于合理设计和合成新的碳水化合物药物。

议定书 7

平行板流动室中的动态流动分析

John T. Patton~GlycoTech Corporation, 罗克维尔, 马里兰 20850

F low 测定允许在明确的壁剪切应力下可视化细胞粘附。细胞粘附的不同事件的可视化可以通过选择性图像采集和随后的图像处理来量化。流动测定特别适用于研究在比大多数静态粘附测定更短的时间尺度内非常迅速地发生的粘附事件。此外，可以研究初始事件之后的事件，例如细胞稳定和扩散，从而深入了解特定细胞-细胞或细胞-基质粘附行为的动力学。

议定书 8

静态条件下细胞粘附的测量

John L. Magnani~GlycoTech Corporation, 罗克维尔, 马里兰 20850

许多不同的分子已被描述为促进细胞粘附，包括几种细胞表面碳水化合物结合蛋白。由于洗涤孔产生的剪切力，在方便的 96 孔微量滴定板格式中测量细胞粘附很困难。该协议介绍了使用充满液体的洗涤室，该洗涤室通过重力分离未结合的细胞，从而消除不受控制的剪切力和贴壁细胞通过液体/空气界面的通道。该协议也可用于分析促进或抑制细胞粘附的分子。

议定书 9

完整细胞对 TLC 板上已溶解糖脂的碳水化合物特异性粘附

Ronald L. Schnaar~约翰霍普金斯大学医学院教授，马里兰州巴尔的摩市 21205

该程序允许检测特定细胞粘附到 TLC 板上分辨的糖脂。

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