细胞/ 组织总RNA 提取试剂盒

FastPure^® Cell/Tissue Total RNA Isolation Kit

细胞/ 组织总RNA 提取试剂盒

纯度高: 获得的RNA纯度高，可直接用于下游纯度要求高的实验。

基因组残留少: 配有基因组DNA吸附柱和DNase膜上消化模块，可有效去除DNA污染。

简单快速: 无需配备其他试剂、无需酚氯FANG抽提、常温操作即可。

通用性强: 适用于多种不同类型的细胞、组织RNA的提取。

分别使用Vazyme #RC101和T公司同类试剂提取2 × 10⁶ 个293T细胞总RNA，使用100 μl洗脱体积，取1 ul提取产物进行琼脂糖凝胶电泳。从图中可以看出，Vazyme #RC101提取RNA浓度高于T公司同类产品。

本试剂盒可从动物细胞或组织中快速提取总RNA。试剂盒基于硅胶柱纯化技术，提取过程中无需使用有毒的酚/ 氯FANG抽提，全程仅需30 min。试剂盒中gDNA-Filter Columns能够有效的分离上清和组织裂解物并吸附去除gDNA，另外，试剂盒中配有DNase膜上消化模块，可有效去除DNA 污染；RNAPure Columns能高效的结合RNA，配以优化后的Buffer溶液，使得到的总RNA纯度高，无蛋白和其他杂质污染，可用于RT-PCR、Real-time PCR、芯片分析等多种下游实验。

DNase I置于-20℃保存；

Buffer RL1在加入β-巯基乙醇后，可在4℃保存1个月；

其余组分均可在常温(15-25℃)干燥条件下保存。

细胞/ 组织总RNA 提取试剂盒

Q1：RNA提取得率低。

A1：(1) 样本保存不当或者样本保存时间过久。样本保存不当或者保存时间过长都有可能导致RNA的降解，采集新鲜样本或经过液氮速冻后保存于-70℃或液氮中的样本。

(2) 匀浆或者液氮研磨不充分。匀浆或者液氮研磨不充分，裂解不充分，导致RNA的释放不充分。

(3) 组织或者细胞中RNA含量偏低：不同细胞和组织中 RNA 的丰度不同，需做预实验确定合适的样品起始量。

(4) 组织起始量太少或者太多：样品量过少，则细胞组织中RNA含量较低；样品量过多则可能超过裂解液的裂解能力，裂解将不*，从而导致RNA得率低或质量下降。

(5) 洗脱不充分。RNase-free ddH₂O滴加到纯化柱膜中央。纯化柱的洗脱体积为50-200 μl，若洗脱效果不理想，可以加入在65℃预热的RNase-free ddH₂O后，延长室温放置时间，离心后进行第二次洗脱。

Q2：gDNA-Filter Columns堵塞问题。

A2：(1) 样品用量太多。本试剂盒适用于提取10-20 mg动物组织或者2-5×10⁶个细胞，超量的组织会降低产量以及纯度，操作时应减少样本使用量。

(2) 样品富含肌纤维。肌肉、心脏以及皮肤等富含肌纤维，肌纤维的分子量大，会引起柱子堵塞，样本处理时采用液氮研磨方式会降低堵柱现象。

(3) 组织研磨或者匀浆不充分。研磨或者匀浆不充分时，碎片有可能导致柱堵塞，将裂解后的液体先进行 13,000×g 离心5 min，取上清再加入gDNA-Filter Columns。

Q3：RNA降解。

A3：纯化后的RNA降解与样本质量、是否被RNase污染、操作方式等因素有关：

(1) 样本因为没有及时保存，导致RNA降解。组织样本或者细胞在收集后若不及时进行后续实验，液氮速冻后于-80℃保存。

(2) 样本反复冻融。组织样本保存时，分小块保存，避免因反复冻融导致样本降解。

(3) 电泳原因。常见的RNA降解现象部分因为电泳过程引起的，电泳前将电泳槽用3％双氧水浸泡20 min，之后用RNase-free ddH₂O进行冲洗，电泳缓冲液用RNase-free ddH₂O配置。

(4) 确保提取过程中使用的枪头和离心管均为RNase-free。

Q4：提取的RNA有基因组DNA污染。

A4：不同种类组织细胞DNA、RNA含量相差很大，请勿超过20 mg组织和5×10⁶细胞。如肝脏、脾脏和肾脏DNA含量丰富，请勿超过10 mg，否则会导致基因组残留过多。gDNA-Filter Columns能够有效去除体系中大部分DNA，如果下游实验对微量DNA十分敏感，可根据具体情况选择选择使用以下方案：

(1) 使用试剂盒提供的DNase I进行膜上消化清除DNA污染。

(2) 设计引物时选用跨内含子的引物，从而避免基因组DNA模板参与扩增反应。

(3) 逆转录时选择含有基因组去除模块的逆转录试剂。