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面议ELISpot检测INF-γ 酶联免疫斑点
IFN-γ(干扰素-γ)主要产生于激活的T细胞和NK细胞。TH1型响应的特点是通过辅助T细胞和细胞毒T细胞产生IFN-γ,所以高水平IFN-γ的产生是由于寄主应对细胞内的病原体产生了有效的防御。
酶联免疫斑点法通常用于评估抗原特异的T细胞的功效,即检测IFN-γ的释放。酶联免疫斑点法是一种非常灵敏的免疫检测方法,它可以在单细胞水平检测细胞因子的分泌。酶联免疫斑点法是灵敏的细胞检测方法之一,它检测的灵敏度可以达到1:100 000个细胞。依赖于化学物质的分析,酶联免疫斑点分析可以比传统的ELISA灵敏20到200倍。
(1)Mouse IFN-γ ELISpotkit(ALP)(Mabtech 3321-2A)
(2)Human IFN-γ ELISpotkit(ALP)(Mabtech 3420-2A)
注释:以上的ELISpotKits可用性已经经过作者测试,用户也可以用按自己的需要换别的替代。
(1)SIGMAFASTTM BCIP/NBT(Sigma B5655)
(3)倒掉培养基,并加入含有诱导物的细胞悬浮液。
一般要做如下几组:不含诱导物的细胞、混有抗原(蛋白或多肽)的细胞和含PMA(10 ng/ml)和钙离子载体Ionomycin(500 ng/ml)的细胞(阳性对照)。每个孔中的细胞数目决定于你的样品中IFN释放细胞的比例,通常是从2×104到2.5×105。如果靶细胞是多肽脉冲T2(T2pulsedwithpeptide)或瘤细胞,那么T细胞/靶细胞的比例需要满足达到佳的检测效果。
(8)把板放在黑暗中反应,直到有清楚的斑点显示出来。