ELISPOT酶联免疫斑点技术常见问题biosys

ELISpot原理：将细胞置于包被有特异性抗体的96孔板中培养，在有刺激的条件下，细胞分泌的细胞因子或免疫球蛋白会被包被抗体捕获。移除细胞后，被捕获的细胞因子可进一步使用生物素标记的二抗来标识，其后再与酶标记的亲和素作用，并加入底物使其呈色，有反应作用的细胞会留下直径大小不等的染色斑点。

1.您推荐哪种ELISpot板子？

我们建议使用PVDF膜的96孔ELISpot板子，有效结合大量捕获抗体，前提是膜用乙醇预处理（即活化）。

2.您推荐那种检测仪器？

我们建议使用德国biosys Bioreader 7000E酶联免疫斑点图像分析仪。与市场所售仪器相比，*的减除幻影技术，像素高，更加标准化。

3.板的颜色是否重要，我应选择白色板子还是透明板子？

白色和透明ELISpot板具有相同类型的PVDF膜。这两种颜色在读板仪中略有不同，但并不重要。（如果有没有添加液体的漏掉的孔，透明的板子很容易看见。）

4.包被前为什么要用乙醇对ELISpot板进行预处理？

ELISpot板子的膜具有多孔疏水结构。为了使大量捕获抗体能够结合，应该用乙醇处理膜以使其亲水。这是获得高质量斑点所必需的致密抗体包被层。

5.如何清洗和清空ELISpot板？

可以使用多通道移液器手动清洗板子。在不需要无菌条件的洗涤步骤中，可以使用常规ELISA板洗涤器，条件是洗涤头适合于ELISpot板。将盘子倒置在废物容器上，将盘子倒空。当手动清空板子时，确保液体不会从废物容器中“溅出”。当盘子已经清空时，可以将其倒置在干净的纸巾上，以从孔中除去残留的液体。对于底物反应后的终洗涤，可以用自来水冲洗BCIP/NBT-Plus，去离子水或蒸馏水冲洗TMB。

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