产品名称：人鼻咽癌细胞6-10B​    

细胞规格：1-3×10^6细胞量

库存状态：现货

培养液：RPMI-1640+10% FBS

运输方式：常温顺丰运输和干冰顺丰运输

货 期：复苏细胞需要1-2周，冻存细胞的需要3-5天（特殊情况会有说明）

质 控：无支原体、无污染、符合标准

研究范围：仅供科研使用

人鼻咽癌细胞6-10B​  ，我司主要经营产品是国内传代细胞和细胞培养相关的生物试剂。GIBCO、HyClone、NTC、SIGMA、 BI 、GEMINI、PAN和SBI无外泌体血清等高品质血清。常规液体培养基、胰酶、双抗、无血清冻存液、日本三菱产品、ELISA 试剂盒等产品。售后完善，我们以饱满的热情欢迎新老客户选购！

在细胞培养过程中会出现这样或那样的问题，这些问题从细胞生长角度来说，针对细胞不贴壁、生长缓慢、生长不好，甚至死亡的原因，我们做以下分析并提出相对应的解决方法。

一、培养细胞不贴壁

可能原因：

 胰蛋白酶消化过度 ；

 支原体污染 ；

 培养基pH值过碱（NaHCO3分解）；               

 细胞老化 ；

 接种细胞起始浓度太低或太高 。

解决方法：

 缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度；

 分离培养物，检测支原体。清洁支架或培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物；

 使用无菌醋酸溶液调整pH值或充入无菌CO2 ；

 启用新的保种细胞 ；

 调节zui佳接种细胞浓度。

二、悬浮细胞成簇

可能原因：

 培养液中含钙、镁离子 ；

 支原体污染；

 蛋白酶过度消化使得细胞裂解；

 DNA污染 。

解决方法：

 用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞，轻巧吹吸细胞获得单细胞悬液；

 分离培养物，检测支原体；

 用DNaseI处理细胞。

三、培养细胞生长缓慢

可能原因：

 由于更换不同培养液或血清；

 培养液中一些细胞生长必需成分如谷氨酰胺或生长因子耗尽或缺乏或已被破坏；

 培养物中有少量细菌或真菌污染；

 试剂保存不当；

 接种细胞起始浓度太低；

 细胞已老化；

 支原体污染 。

解决方法：

 比较新培养液与原培养液成分，比较新血清与旧血清支持细胞生长实验，让细胞逐渐适应新培养液；

 换入新鲜配置培养液，或补加谷氨酰胺及生长因子；

 用无抗生素培养液培养，如发现污染，丢弃培养物；

 血清需保存在-10到-20℃。培养液需在2-8℃避光保存。含血清*培养液在2-8℃保存，需在1周内用完；

 增加接种细胞起始浓度；

 换用新的保种细胞；

 分离培养物，检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。

四、培养细胞生长不好

可能原因：

 细胞本身的状态

细胞传代次数多，细胞老化；

细胞的接种量：接种量过低，细胞生长缓慢；

细胞传代时间过晚：细胞中毒，影响传代后的细胞生长；

胰酶消化时间过长或过短：时间过长，细胞死亡；时间过短，细胞未*分离而成团，细胞死亡；

细胞的冻存与复苏：慢冻速融。

 污染

支原体污染；

霉菌污染。

 培养基或血清

更换血清或培养基之前未进行验证；

选择的培养基是否合适；

培养基配制是否准确无误。

 培养环境

CO2供应是否正常；

培养箱或摇床温度控制是否正确。

解决方法：

根据以上四个方面的可能原因，做出针对性的解决方案

 注意细胞的本身状态：如传代次数、接种量等；

 避免产生污染（用正规、合法、可溯源的血清）；

 要用合适的血清或培养基，zui好经过验证；

 注意实验室的环境。

五、培养细胞死亡

可能原因：

 培养箱内无CO2；

 培养箱内温度波动太大；

 细胞冻存或复苏过程中损伤；

 培养液渗透压不正确；

 培养液中有毒代谢产物堆积 。

解决方法：

 检测培养箱内CO2；

 检查培养箱内温度；

 取新的保存细胞种；

 检测培养液渗透压；

 换入新鲜培养液。

细胞培养，尤其是细胞系的培养，就细胞消化而言，多做、善于总结，就可以把细胞养的越来越好。

绝大部分细胞消化只要用胰酶润洗一遍即可：

吸去胰酶后，残留的那些无法计算体积的附着在细胞表面的微量胰酶在37度一般不到2min足够消化细胞（绝大部分1min不到）。对于这些细胞原则上不要用胰酶孵育细胞，连续这样传代，对细胞伤害很大。简单的程序是PBS润洗吸去，胰酶润洗吸去，然后37度消化。

怎样算是消化好了呢？

不需要把细胞全部消化成间隔分布很离散的单个圆形才算消化好了，一般你肉眼观察贴壁细胞层，只要能移动了，多半呈沙壮移动，其实已经可以了。

一般能移动了，说明细胞与培养基质材料的附着已经消失了，细胞之间的附着也已经消失了，细胞已经独立分布了（虽然没有呈现很广的离散分布）。这个时候应该停止消化，不要等到看到镜下所有细胞都分离得非常好，间隙很大，才停止。

细胞就是*成单个细胞悬液，之后在贴壁的过程中仍然会聚集，这个是贴壁培养的细胞，尤其是肿瘤细胞的一个特性，你可以尝试，准备100%的单个细胞悬液，贴壁后观察细胞，仍然是几个几个细胞聚集在一起。

一些悬浮培养细胞也是如此，容易聚集，不要过几个小时就拿出来吹打成单细胞悬液。细胞只要能从基质上脱离下来，即使是成片的（比如Calu-3细胞），吹打不超过20次（一般10次即可），成小规模聚集（10个细胞左右）是正常的，不要再去延长消化时间，等待单细胞悬液出现。

比较难消化的细胞：

润洗方法5min还不能消化，以结肠癌细胞为例，比如HCT15、LS411和KM12细胞，胰酶消化，一般10 cm 培养皿，一次多加入300ul-500ul就足够了。即使这样难消化的细胞，一般不超过5min，即可见细胞成片移动，就应该停止消化。一些正常细胞也会有难消化的时候，比如tsDC细胞，用胰酶孵育，3min左右即可看到成片沙状移动。

常规的细胞实验，受消化影响不是很大：

如果不用胰酶去孵育而使用润洗的方法消化的话（难消化细胞例外）。但少数实验，比如病毒包装，对细胞代数，对细胞状态要求*。这个时候，胰酶消化，就是润洗，都会对细胞包装病毒的能力有影响，传代次数一多，细胞包装能力就会逐渐下降。这个时候都不用胰酶消化，用一些盐溶液（不是EDTA液）即可。这些盐溶液通过影响细胞外基质相关酶的活性，来使得细胞脱离基质附着表面，但不切割任何蛋白。

EDTA的作用：

许多人不用胰酶，只用EDTA，或者用胰酶/EDTA联合作用。这里要明白，胰酶切割细胞外基质的一些负责粘连和附着的蛋白，而EDTA通过螯合Ca离子，作用于整联蛋白的活性，所以EDTA的作用更加温和。有的人在胰酶里添加一些EDTA，或者对付特别难消化的细胞，添加多一些EDTA，就是这个道理。一般不要试图延长消化时间（如果10min还消化不*的话），而应该想其它办法。

PBS洗涤：

消化之前用PBS洗涤，是常见的操作，因为血清中含有抑制胰酶的蛋白。对于一些难消化细胞，可以配制不含Ca，Mg离子的PBS，因为这些离子也会抑制胰酶的活性。但对于绝大部分细胞用胰酶或者EDTA溶液润洗即可消化，不需要配制不含Ca，Mg离子的溶液。

每段时间定期对细胞房、培养箱&水盘、水浴锅、废液桶等容易染菌的个角落细菌、真菌等微生物的清除，每次操作完都整理好细胞房，带好手套、口罩、鞋套，防止人为因素污染。

MCF7/Taxol人乳腺癌紫杉醇耐药株

HCT8/5-fu 人回肠直肠腺癌细胞五氟尿嘧啶耐药株

LOVO/5-FU 人结肠癌细胞五氟尿嘧啶耐药株

HCT116/L人结肠癌奥沙利铂耐药细胞

HL60/ADR人早幼粒急性白血病细胞耐阿霉素株

PC9GR(PC9R)人肺癌细胞耐吉非替尼

LOVO/ADR人结肠癌细胞阿霉素耐药株

HNE1/DDP人鼻咽癌细胞顺铂耐药株

SGC7901/5-fu人胃癌细胞五氟尿嘧啶耐药株

A549/DDP人肺癌细胞顺铂耐药株

MCF-7/DDP人乳腺癌细胞顺铂耐药株

A549/ADR人肺癌细胞阿霉素耐药株

SGC7901/DDP人胃癌细胞顺铂耐药株

SKOV3/DDP人卵巢癌细胞顺铂耐药株

HELA/DDP人宫颈癌耐顺铂细胞株

3T3-L1 小鼠胚胎成纤维细胞

NIH/3T3小鼠胚胎细胞

Raw264.7小鼠单核巨噬白血病细胞

B16-F10小鼠黑色素瘤高转细胞

B16 小鼠黑色素瘤细胞

CT26.WT小鼠结肠癌细胞

SV40 MES 13小鼠肾小球系膜细胞

F9 小鼠畸胎瘤细胞

MLE-12 小鼠肺泡上皮细胞

Sp2/0-Ag14 小鼠骨髓瘤细胞

BV2 小鼠小胶质细胞  

DC2.4小鼠树突状细胞

U14 小鼠子宫颈癌细胞

M-NFS-60小鼠骨髓性白血病细胞

mMSC小鼠骨髓间充质干细胞

HL-1小鼠心肌细胞

TM3 小鼠睾丸间质细胞

k7m2.wt小鼠骨肉瘤成骨细胞

mc3t3 e1小鼠胚胎成骨细胞前体细胞

hepa1-6 小鼠肝癌细胞

SP2/0小鼠骨髓瘤细胞

HT22小鼠海马神经元细胞系

MC38小鼠结肠癌细胞

mpc5小鼠足细胞

4T1 小鼠乳腺癌细胞

ANA-1小鼠巨噬细胞

TM4 小鼠睾丸支持细胞

STO 小鼠胚胎成纤维细胞

bend.3 小鼠脑微血管内皮细胞

J774A.1小鼠单核巨噬细胞

H9C2 大鼠心肌细胞

PC-12(低分化) 大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(低分化)

PC-12(高分化) 大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(高分化)

AR42J 大鼠胰腺外分泌细胞

IEC-6 大鼠小肠引窝上皮细胞

RT4-D6P2T 大鼠神经鞘瘤细胞

INS-1 大鼠胰岛细胞瘤细胞

NRK-52E 大鼠肾小管导管上皮细胞

BHK-21 仓鼠肾成纤维细胞

PK-15 猪肾细胞

Duckembyro 鸭胚胎成纤维细胞

vero 绿猴肾细胞

Hep3B人肝癌细胞

HPAC人胰腺癌细胞

HT-1376 人膀胱癌细胞

JAR 人胎盘绒毛癌细胞

KNS-89 人脑胶质细胞瘤细胞

双抗 15140-122、SV30010

胰酶 25200-056、SH30042.01

GIBCO 胰酶 25200-072

DMEM高糖培养基 C11995500BT

DMEM低糖培养基 C11885500BT

PBS C10010500BT

1640培养基 C11875500BT

DMEM/F12 C11330500BT

MEM培养基 C11095500BT

α-MEM C12571500BT

DMEM低糖 SH30021.01

DMEM高糖 SH30022.01、SH30243.01

DMEM/F-12 1:1 SH30023.01

MEM/EBSS SH30024.01

PBS缓冲液 SH30256.01

α-MEM SH30265.01

RPMI-1640 SH30809.01

DPBS SH30028.02