产品名称：鸡胚成纤维细胞永生化（种属鉴定）

规格： 5*10 5   

细胞详述

近年来，有关干细胞的研究是生物技术领域的热点之一。胚胎成纤维细胞具有相对容易获得，增殖能力强等特点，因此胚胎成纤维细胞常作为哺乳动物干细胞培养的饲养层细胞，主要分泌谋学细胞因子，如成纤维细胞生长因子，白血病抑制因子等，以促进干细胞增殖及抑制分化。

该细胞通过慢病毒转染的方式携带SV40基因。

注意事项：  收到细胞后第一次传代建议1：2传代，充液培养基是维持培养基，不能用来培养细胞。

细胞特性

1) 细胞来源于实验动物正常胚胎组织。

2) 细胞鉴定：波形蛋白（Vimentin）免疫荧光染色为阳性。

3) 经鉴定细胞纯度高于90%。

4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

5) 细胞生长方式：长梭状细胞，贴壁培养。

产品的运输和保存

视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。

1) 1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。

2) T-25培养瓶充满wan全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。

产品使用

1) 本产品仅能用于科研

2) 本产品未通过直接用于活体动物和人的审核

3) 本产品未通过用于活体诊断的审核

鸡胚成纤维细胞永生化相关细胞列表

01 什么是细胞永生化？

   正常组织来源的细胞在体外培养条件下可分裂生长，但经过有限次数的传代后，就会停止增殖，发生衰老和死亡，这种现象称之为海夫利克极限。有的细胞自发或受外界因素的影响，可以从增殖衰老危机中逃离，从而拥有无限增殖的能力，该过程称之为细胞永生化（cell immortalization）。

   细胞永生化是癌变的必经途径。

02 细胞永生化的方法？

   细胞自发永生化的几率非常小，于人类细胞就更为罕见。

   人为干涉让细胞永生化的方法包括：放射处理、端粒酶激活、病毒基因转染、原癌基因激活、抑癌基因抑制等。其中，听过慢病毒感染使细胞过表达猴肾病毒SV40 T抗原或人端粒酶逆转录酶hTERT基因，是常用的两种细胞永生化的方法。

01端粒酶激活

   端粒酶是一种能延长端粒末端的核糖核蛋白酶，由RNA和蛋白质组成。端粒酶能以自身的RNA为模板，从端粒DNA3’-OH 末端延伸端粒或合成新的端粒DNA， 以补偿细胞分裂时染色体末端的缩短，从而维持端粒的长度，使细胞不会因端粒耗尽而出现凋亡。

   正常情况下，大多数体细胞端粒酶的表达是严格调控的，表达是瞬时和低水平的。在原代培养的细胞中稳定表达人端粒酶催化亚基(hTERT)基因能稳定端粒的长度，使细胞易于永生化，因此hTERT的激活是细胞永生化的重要步骤。

   虽然激活端粒酶活性能够使多种人和动物的细胞永生化，但是对于有些细胞，重建端粒酶活性并不足以使细胞永生化，还需要借助癌基因法。

02癌基因法

   一些原癌基因，如Myc, c-Jun, c-Ias, vsrc和Mdm2，通过基因转染可介导目的细胞永生化。c-Myc是最早被发现的原癌基因，有许多与瘤化相关的功能区域，其转录表达的蛋白通过核膜进入细胞核与端粒酶的启动子结合位点特异性结合，诱导端粒酶mRNA快速表达，直接激活端粒酶活性，促进细胞进入永生化。

   细胞永生化过程中，抑癌基因如p53, pRb, BRCA1, DPC4等，通过等位基因隐性作用、抑癌基因的显性负作用等逐渐失去活性，细胞老化途径受阻。实验证明端粒酶的活性与抑癌基因表达产物的下调有相关关系，推测抑癌基因的失活协同端粒酶的激活共同参与细胞永生化进程。

03病毒基因转染

很多病毒感染能够诱导细胞永生化，例如EB病毒(epstein-barr virus, EBV)、猿猴病毒40 (simian virus40, SV40)和人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV)。这些病毒感染其天然宿主细胞，能诱导细胞永生化。

   EBV能使B淋巴母细胞永生化形成淋巴母细胞样细胞系，它是通过潜伏蛋白激活细胞因子与其受体相互作用的途径使细胞永生的。EBV永生化B细胞的一个显著的特点是端粒酶活性的提高，这可能是导致B细胞永生的主要原因。目前，EB病毒介导的细胞永生化应用最多的是B淋巴细胞，其他细胞中的应用很少。

   SV40是简单的真核细胞病毒，SV40的T抗原片段是常用的目的片段，将其整合入靶细胞核内并表达，可导致细胞增殖活力的改变并表现出多种与肿瘤相关的转化显型。应用的方法包括：野生型SV40病毒共培养感染靶细胞、磷酸钙法、电穿孔以及逆转录病毒载体法等。

   HPV已成功将人的包皮细胞、角化上皮以及乳腺、胰导管和口腔等的上皮细胞永生化。HPV病毒的早期表达蛋白E6和E7在细胞永生化中起决定性作用。E6和E7蛋白能够改变细胞的终末分化，诱导细胞进入S期，使细胞绕过正常细胞的周期检查点。