细胞计数仪是一种快速简便的自动化细胞数量和活率测量装置，目前主要通过基于显微图像的图像识别法和基于阻抗的电阻抗计数法。

基于显微图像的图像识别法，通常通过台盼蓝染色或AO/PI等荧光染料染色，整合先进的光学成像技术和智能图像识别技术，进行自动细胞计数检测。台盼蓝是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性，以检测细胞是否存活。活细胞的细胞膜完整，能排斥台盼蓝，不会被染成蓝色；而死细胞由于细胞膜破损或不完整，会被台盼蓝染成蓝色，因此可借助台盼蓝染色进行细胞计数，区分死活细胞。吖啶橙（AO）和碘化丙啶（PI）是可以与细胞核内双链DNA结合的荧光染料。

AO可以自由穿透细胞膜，嵌入所有细胞（活细胞和死细胞）的细胞核中发出绿色荧光；PI只能通过破损的细胞膜，即死细胞的细胞膜，嵌入死细胞的细胞核中发出红色荧光。当两种染料同时存在于死细胞核中时，会发生荧光共振能量转移，从而导致死细胞发出红色荧光。因此可通过AO/PI准确区分死活细胞，进行准确细胞计数。

细胞计数仪计量校准以下校准项目应在细胞计数仪经过开机预热、仪器达到正常工作条件后进行，校准前应当确保仪器工作状态正常，参照附录 A 进行校准原始数据记录。

1 外观要求用目视并配合手动操作进行检查。仪器外表应光滑平整，不应有影响工作性能的机械损伤；显示屏表面应平整洁净无划痕，读数清晰；开关及按键功能良好。仪器应有以下标识：名称、型号、编号、生产厂家、出厂日期。

2 测试前准备开启仪器，参照仪器使用说明书，使仪器达到最佳工作条件。根据客户使用要求、被校准仪器的日常工作模式和选取的标准物质类型选取合适的细胞测量模式。

3 空白值 JJF xxxx-xxxx 7取空白稀释液、纯水或蒸馏水进行上样计数，测量 4 次，记录测量值并取其中的最高值作为空白值。

4 示值误差仪器的示值误差以细胞浓度（总细胞浓度、活细胞浓度和死细胞浓度）标准物质、细胞活率标准物质、颗粒直径标准物质测量值与标准值的误差表示。根据被校准仪器的日常工作模式选取合适浓度、比例和颗粒直径的标准物质，使用标准物质前上下颠倒 30-50 次左右从而保证充分混匀（瓶底无沉积物）。用移液器从充分混匀的标准物质样本液体中间层吸取液体进行上样计数，测量 5 次，记录测量值，并按照公式（1）进行示值误差计算。CiCs（1）式中：—细胞计数器示值误差，/mL、%或 μm； Ci—5 次测量值的平值，/mL、%或 μmCs—标准值，/mL、%或 μm。

5 测量重复性仪器重复性以细胞浓度（总细胞浓度、活细胞浓度和死细胞浓度）标准物质、细胞活率标准物质、颗粒直径标准物质 10 次测量值的实验标准偏差表示。根据被校准仪器的日常工作模式选取合适浓度、比例和颗粒直径的标准物质，使用标准物质前上下颠倒 30-50 次左右从而保证充分混匀（瓶底无沉积物）。用移液器从充分混匀的标准物质样本液体中间层吸取液体进行上样计数，测量 10 次，记录测量值，并按照公式

（1）进行示值误差计算。1( )21nC CSTDnii i

（2）式中：STD-测量值的标准偏差，/mL、%或 μm； n—测量次数； JJF xxxx-xxxx 8 Ci —第 i 次测量值，/mL、%或 μm； Ci —测量平均值，/mL、%或 μm。8 校准结果表达经校准后的细胞计数仪应填发校准证书，校准证书应符合 JJF1071-2010 中5.12 的要求，参照附录 C 给出校准项目名称、测量值以及扩展不确定度。9 复校时间间隔送校单位可根据实际情况自主决定细胞计数仪的复校时间间隔，建议不超过1 年。

公司背景介绍：

泽恒.华谱在计量校准、验证与确认的优势是专注做生物制药质控服务，针对一些特殊的仪器都非常熟悉，核心团队来源于制药公司和仪器厂家，对仪器和GMP法规都很熟悉，比如：我们团队专门研发了替代进口的荧光定量PCR仪校准装置，大大降低荧光定量/定性PCR仪校准的成本（远低于同行）；我们开发了细胞计数仪的校准内部规程；开发了细胞复苏仪的内部校准规程；开发了凝胶电泳扫描仪的校准规程；我们开发了温度验证所需要的超低温和超高温一体化无线探头，降低用户大量使用探头时的成本，代替了进口；这些例子还有很多，因为我们都是生物出身，所以我们关注每一个生物用户工艺要求，在生物制药仪器设备上面专注，“与质量同行、做仪器设备质控”，为了让生物制药更安全而努力。

我们在服务上与其它单位密切合作，包括强检、特检或做不了的都帮客户代送代取，省时、省力、方便客户。

泽恒.华谱是专注于为生物制药行业提供实验室仪器计量校准、仪器设备验证与验证/厂房验证的专业服务商。我们给制药客户解决的是一站式QC/QA/工程部/验证部/生产部的质控外包服务。