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一、RNA的提取
二、DNase|消化样品RNA 中的DNA
三、RNA琼脂糖凝胶电泳
四、RNA反转录为cDNA
Real-Time PCR引物设计的要求
1Tm=55~65℃
2 GC=30~80%
3 PCR扩增产物长度:引物的产物大小不要太大,一般在80~300 bp之间都可。
4 引物的退火温度要高,一般要在60 ℃以上。
五、cDNA与引物质量检测
选择特异性好,扩增效率高的引物作为实时荧光使用引物。
六、利用相对定量的方法分析目的基因表达量的情况:
常用的看家基因有B-actin,GAPDH,18S rRNA
七、定量PCR检测
八、扩增曲线和溶解曲线
溶解曲线全部为单峰表明为特异性扩增,荧光扩增曲线可以分成三个阶段;荧光背暑信号阶段,荧光信号指数扩增阶段和平台期。
我们拥有专业的实验室、精良的实验设备和经验丰富的科研技术人员。技术团队包括研究员(博士后)2人,助理研究员(博士)4人,核心研究员(硕士)15人,主要致力于基因组学、转录组学、蛋白质组学、代谢组学、生物化学、病理检测、基因检测等技术在科研中的应用与推广。通过高度细分、较好的的服务平台,为广大客户提供了完善的技术解决方案和服务。目前,及,涉及临床医学、肿瘤生物学、免疫学、细胞生物学、分子生物学等生命科学、医学等诸多领域。