实验过程

(1)标准品的稀释与加样:标准品按照说明书稀释好五个梯度，各个梯度每孔加样量都为50uL ;

(2)加样:分别设空白孔、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40uL，然后再加待测样品10uL。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀;

(3)温育:用封板膜封板后置37℃温育30min;

(4)配液洗涤:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用;小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30sec后弃去，如此重复5次，拍干;

(5)加酶:每孔加入酶标试剂50uL，空白孔除外;

(6)温育:用封板膜封板后置37℃温育30min ;

(7)洗涤:小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30sec后弃去，如此重复5次，拍干;

(8)显色:每孔先加入显色剂A50uL，再加入显色剂B50uL，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15min;

(9)终止:每孔加终止液50uL，终止反应;

(10)测定:以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15min以内进行。

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