操作步骤:

1）使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2）根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。
3）加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
4）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5）每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7）每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
8）取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9）在450nm波长处测定各孔的OD值。

试剂和样本的控制方法：
一、试剂
1.试剂的选择：国家明确要求要采用批批检定的形式对ELISA试剂严格把关，我司严格按照国家标准进行，已获得国家承认的“三证”，每一个产品都有对应的批号，只要客户提前下单，我们就能为您提供新批次的产品，不必担心会有过期的试剂。我司的试剂，值得您选择。
2.试剂的准备：先将试剂盒先从冰箱中拿出来，在室温下放置20-30 min后，再进行测定，使试剂盒在使用前与室温平衡，这样做的目的能使反应微孔内的温度较快地达到所需的温度，以满足后面的测定需求。
二、样本
1.内源性干扰因素：包括类风湿因子、补体、高浓度的非特异免疫球蛋白、异嗜性抗体、某些自身抗体等；
类风湿因子的控制方法：
①用F(ab)2替代完整的IgG；
②标本用联有热变性IgG的固相吸附剂处理；
③检测抗原时，可用加入到标本稀释液中使RF降解；
补体的控制方法：
①用EDTA稀释标本；
②56℃ 30 min加热血清使C1q灭活；
2.外源性干扰因素：包括标本溶血、细菌污染、保存时间过长或凝固不全等；
控制方法：采血时规范操作，采集的血液勿用力震荡，以防溶血；收集标本时采用无菌试管，经检测后再低温冻存；保存时间不宜过久，检测时尽量采用新鲜标本；对于凝固不全的血标本可适当加入抗凝剂，并放入37℃水中1 h，待充分凝固后再离心分离血清。

具有如下优点：
一、高效、灵敏、特异的抗体；
二、稳定的重复性和可靠性；
三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体；
四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型；
五、性价比非常好，节省实验经费。

α－对羟基甘氨订购|咨询规格：30mg乳腺癌易感基因2和p21蛋白抑制因子抗体DGS-E1ELISAKit桥粒芯糖蛋白-1(DGS-E1)ELISA试盒

土贝母苷订购|咨询规格：20mgELISA试盒人TM4SF20蛋白人96T0.312-20ng/mL大鼠芳香烃受体核转位因子样蛋白(ARNTL)ELISA试盒，英文名：ARNTLELISAKit

埃博霉素A质量规格：国进口EpothiloneASK-N-SH(人神经母细胞瘤细胞)5×106cells/瓶×2

靛玉红;Indirubin订购|咨询规格：20mg雌二醇抗体ACO-2ELISAKit乌头酶2(ACO-2)ELISA试盒

冬凌草素订购|咨询规格：20mg类固醇受体复合物蛋白FKBP5抗体HSPβ8ELISAKit热休克蛋白β8(HSPβ8)ELISA试盒

3－酰基乳香订购|咨询规格：HPLC≥98%;20mgⅢ型胶原蛋白/胶原蛋白3/3型胶原蛋白抗体FECHELISAKit亚铁螯合酶(FECH)ELISA试盒

吡拉西坦质量规格：>99%Piracetam人肺泡上皮细胞*培养基100mL

苷订购|咨询规格：HPLC≥98%;20mg化肌醇聚盐酶样蛋白1抗体CAP2ELISAKit胞浆抗蛋白水解酶2(CAP2)ELISA试盒

羟唑啉订购|咨询规格：50mgC2CD3蛋白抗体MBP/MBLELISAKit甘露糖结合蛋白/甘露糖结合凝集素(MBP/MBL)ELISA试盒

常春藤皂苷元订购|咨询规格：HPLC≥98%;20mg毛细管形态发生蛋白1抗体FⅧAgELISAKit第八因子相关抗原(FⅧAg)ELISA试盒

DL-交酯(>98.0%(T))质量规格：>98.0%(T)DL-Lactide桔橙小单孢菌Micromonosporaaurantiaca

Benzoicacid保存：-20℃规格：50mg视黄醇脱酶11/型肝炎病毒核心蛋白抗体

血竭素高盐;Dracohodinp规格：20mg订购|咨询HO-8910PM(人高转移卵巢细胞)5×106cells/瓶×2

D-阿拉伯糖醇;Adonito订购|咨询规格：20mg神经型一化合成酶结合蛋白抗体anti-BP180-AbELISAKit人抗BP180抗体(anti-BP180-Ab)ELISA试盒
ICD elisa试剂盒CEP164C11orf74人激素敏感性脂肪酶(HSL)免疫试盒

CEP170C12ORF4人激动异构酶/细胞分裂素MB(CKMB)免疫试盒

CDX4C12ORF24人基质细胞衍生因子1β(SDF-1β/SDF1B)免疫试盒

CUTCCNGB1人基质细胞衍生因子1a(SDF1A)免疫试盒

CUTL1CD153人基质裂解蛋白/基质溶素(MAT)免疫试盒

CTNSCytokeratin 10+14+17+19+42人基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)免疫试盒

CTRB1CK10/Cytokeratin 10人基质金属蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)免疫试盒 VATSLC4A4脂肪细胞型脂肪结合蛋白

VCPSFTPD脂肪酰辅酶A还原酶2抗体

VDACSpectrin alpha chain, erythrocytic 1脆性X相关蛋白样2抗体

phospho-VEGFR2(Tyr951)SNX5脂肪酰胺水解酶2抗体

测定步骤：
1.加样
1. 除包被外都需45度加样
 2.加样体积要准确
3.管底加样，不能加在管壁上
4.加样时不能产生气泡
2.温浴 
1.加标本后和加结合物后，应立即放入按规定的反应温 度的水浴箱。
2.各ELISA板不应叠在一起。
3.为避免蒸发，板上应加盖，或将板平放在底部垫有湿 纱布的金属湿盒中。
4.加入底物后，反应的时间和温度通常不做严格要求。 如室温高于20℃，ELISA板可避光放在实验台上，以便 不时观察，待对照管显色适当时，即可终止酶反应。
3.洗涤 
1.洗涤在ELISA过程中不是反应步骤，但却 是决定实验成败的关键。
2.目的是洗去反应液中没有与固相抗原或 抗体结合的物质以及在反应过程中非特 异性吸附于固相载体的干扰物质。
4.读板 
1.阴性对照颜色极浅，在定性测定中一般 可采用目视比色。
2.如用酶标仪测定结果，准确性决定于 ELISA板底的平整与透明度、酶标仪的质 量和软件的算法。