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Protein A/G Magnetic Beads 磁珠
Protein A/G磁珠在大小为0.2 um的纳米磁珠上共价结合了大量的Protein A/G蛋白，与传统的Protein A/G免疫沉淀琼脂糖凝胶比较，抗体结合能力相同，背景更低的特点，由于采用磁性分离，使得每次IP和CoIP可以节省40%的时间。
名称 | 特性 |
磁珠大小 | 0.2 μm |
磁珠浓度 | 10 mg/mL |
IgG 结合量 | 0.5 mg/mL |
适用范围 | IP，CoIP等 |
稳定性 | pH 6-8, 4oC长期稳定 |
储存条件 | 4oC |
Protein A/G Magnetic Beads 磁珠储存条件
pH 6-8, 4oC长期稳定，禁止产品冻结。
Protein A/G Magnetic Beads 磁珠使用说明
1. 样品制备
请根据不同的样品选择合适的处理方法：
样品 | 样品处理 |
血清 | 若目标蛋白丰度较高，建议用结合缓冲液稀释血清样品至目标蛋白终浓度为10~100 µg/mL，置于冰上备用（或置于-20℃长期保存）。 |
悬浮细胞 | 离心收集细胞(4oC, 500 g, 10min)，弃上清后称重，按每毫克细胞50µL的比例用1× PBS洗涤 2次；按每毫克细胞5~10 µL的比例加入结合缓冲液，同时加入蛋白酶抑制剂，混匀后置于冰上处理10min；离心收集上清液(4oC, 12000g，10min)，置于冰上备用（或置于-20oC长期保存）。 |
贴壁细胞 | 移去培养基，按每 1.0×105个细胞150 µL的比例用1×PBS洗涤两次；用细胞刮棒刮脱细胞，收集至1.5 mLEP管内，按每 1.0×105个细胞20~30 µL的比例加入结合缓冲液，同时加入蛋白酶抑制剂，混匀后置于冰上处理10min，离心收集上清液(4oC, 12000g，10min)， 置于冰上备用（或置于-20oC长期保存）。 |
大肠杆菌 | 离心收集大肠杆菌（4oC，12000g，2min），弃上清后称重，按每克（湿重）菌体10 mL的比例用1×PBS洗涤2次；按每克（湿重）菌体5~10 mL的比例加入结合缓冲液，同时加入蛋白酶抑制剂（如终浓度为1 mM的PMSF），重悬菌体，超声裂解细胞，离心收集上清(4oC，12000g，10min)。 |
2. 磁珠预处理：
将磁珠充分混匀，取25~50 µL磁珠，400 µL结合缓冲液洗涤3次，弃上清。
3. 抗体与磁珠结合：
3.1 抗体稀释：结合缓冲液稀释抗体至终浓度为5~50 µg/mL，置于冰上备用。
3.2 抗体结合：将准备好的400 µL抗体加入准备好的磁珠中，置于翻转混合仪孵育（常温30 min，4℃，2 h），后进行磁性分离，收集上清液置于冰上以备后续检测。
3.3洗涤（Washing）：400 µL结合缓冲液洗涤3次，每次10min。
*注意：结合过程中，磁珠可能会出现聚团或呈片状，属于正常现象 ，不会影响实验结果。
4. 抗原与抗体-磁珠复合物结合
4.1 加入400 µL步骤1准备的样品，置于翻转混合仪（常温30 min，4℃，2 h）。
4.2 洗涤（Washing）：400 µL结合缓冲液洗涤4次，每次5min。
4.3 洗脱（Elution）：本操作说明书提供以下两种抗原洗脱方案，操作者可根据后期检测的需要选择不同的抗原洗脱方法。
4.3.1 变性洗脱法：此方法洗脱的样品适用于SDS-PAGE检测。分离磁珠，弃上清，向磁珠中加入60 µL 1× SDS-PAGE Loading Buffer混合均匀，100℃加热10min。分离磁珠，收集上清，进行SDS-PAGE检测。
4.3.1非变性洗脱法：此方法洗脱的样品保持原有的生物活性，可用于后期功能分析。分离磁珠，弃上清，向磁珠中加入25-50 µL洗脱缓冲液，室温孵育10 min；分离磁珠，收集上清液至新的EP管，并立即加入1 µL中和缓冲液将洗脱产物pH调节至中性，用于后期功能分析。
