NovaBlue(DE3)感受态细胞

产品规格CAT#: BFNC86087-01(10×100ul)/BFNC86087-02(50×100ul)

NovaBlue(DE3)：                                        100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                    10μl

保存条件(保质期)：                             -80℃（6个月）

基因型

F^`[ proA⁺B⁺ lacI^q ZΔM15::Tn10 (Tet^R)] endA1 hsdR17(r_k12^-,m_k12⁺) supE44 thi -1 recA1 gyrA96 relA1 lac(DE3)

产品说明

NovaBlue(DE3)来源于K12菌株，具有*的转化效率，是转化效率较高的原核表达菌株，可同时用于普通质粒的构建和蛋白的原核表达。NovaBlue(DE3)菌株染色体DNA中整合了λ噬菌体DE3区，使得NovaBlue(DE3)菌株可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，广泛用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。NovaBlue(DE3)菌株具有四环素抗性，endA1和recA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取；lacZΔM15的存在使NovaBlue(DE3)可用于蓝、白斑筛选。

青旗生物生产的NovaBlue(DE3)感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率达10⁹cfu/μg DNA。

操作方法

1. NovaBlue(DE3)感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手bo打EP管底混匀，冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上（若质粒浓度较高，也可稀释后涂板，务必保证能在平板上挑到单克隆菌落）。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

NovaBlue(DE3)感受态细胞

IPTG配制：

Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside)

by dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.

注意事项

1. 感受态细胞尽量在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

2. 转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。

3. 为获得需要量的蛋白，诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。