ArcticExpress (DE3)感受态细胞

产品规格CAT#: BFNC86090-01(10×100ul)/BFNC86090-02(50×100ul)

ArcticExpress (DE3)：                                       100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                           10μl

保存条件(保质期)：                                   -80℃（6个月）

基因型

E. coli B F– ompT hsdS(rB– mB–) dcm+ Tet^R gal λ(DE3) endA Hte [cpn10cpn60 Gent^R]

产品说明

ArcticExpress (DE3)来源于E. coli B，为Lon和OmpT蛋白酶缺陷型菌株，可促进表达蛋白的稳定。ArcticExpress (DE3)菌株染色体DNA中整合了λ噬菌体DE3区，使得ArcticExpress (DE3)菌株可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，广泛用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。ArcticExpress (DE3)菌株具有四环素，庆大霉素抗性，endA1突变有利于质粒DNA的稳定。[cpn10cpn60 Gent^R]的存在使ArcticExpress (DE3)可以表达适应低温的伴侣蛋白Cpn10和Cpn60（来自嗜冷菌—Oleispira antarctica）。Cpn10和Cpn60伴侣蛋白在4-12℃表现出较高活性，在ArcticExpress (DE3)细胞中表达时，可降低重组蛋白包涵体的形成，增加可溶重组蛋白的表达量及生物活性，比传统的原核表达伴侣蛋白GroEL、GroES等具有更加优异的促融性能。

青旗生物生产的ArcticExpress (DE3)感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率达10⁸cfu/μg DNA。

操作方法

1. ArcticExpress (DE3)感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的质粒，并用手bo打EP管底混匀，冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上（（平板中务必同时含有40ug/ml的庆大霉素和转化质粒本身的筛选抗生素；若质粒浓度较高，也可稀释后涂板，务必保证能在平板上挑到单克隆菌落）。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

ArcticExpress (DE3)感受态细胞

IPTG配制：

    Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside)

    by dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.

注意事项

1. 感受态细胞尽量在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

2. 转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。除复苏培养基为无抗生素外，其余所用培养基、培养液均应含有40ug/ml的庆大霉素，以防质粒丢失。

3. 为获得需要量的蛋白，诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。

4. ArcticExpress (DE3)感受态细胞具有四环素、庆大霉素抗性，不可用于具有四环素、庆大霉素抗性质粒的转化。