HT115(DE3)感受态细胞

产品规格CAT#: BFNC86089-01(10×100ul)/BFNC86089-02(50×100ul)

HT115(DE3)：                                                    100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                           10μl

保存条件(保质期)：                                   -80℃（6个月）

基因型

F- mcrA mcrB, IN(rrnD-rrnE)1 rnc14::Tn10(DE3 lavUV5::T7 polymerase)

产品说明

HT115(DE3)菌株是一类特殊的RNase III缺陷型大肠杆菌菌株，可以饲喂线虫，主要用于秀丽隐杆线虫（C. elegans）的RNAi干扰试验。该菌株可以在LB或2YT培养基中正常生长，Tn10转座子的存在使其具有四环素抗性。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区 (DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶，在IPTG存在时可诱导T7 RNA聚合酶大量表达，进而启动线虫ds RNA的表达)，可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，除了用于线虫RNAi干扰试验，也可用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。

青旗生物生产的HT115(DE3)感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率达0.5×10⁸ cfu/μg DNA。

操作方法

1. HT115(DE3)感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的质粒并用手bo打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的LB无菌培养液，37℃，200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取50 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

HT115(DE3)感受态细胞

IPTG配制：

    Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside)

    by dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.

注意事项

1. 感受态细胞尽量在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

2. 转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。

3. 诱导时，IPTG浓度可根据实验选择使用（0.1-10mM）。

4. 进行线虫RNAi质粒转化时，抗生素使用浓度可参考：氨苄—50ug/ml，四环素—12.5ug/ml。

5. 若进行蛋白表达，为获得需要量的蛋白，诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。