乳酸杆菌鉴定试剂盒API50CHL说明书

原理

API 50 CHL是用于乳酸杆菌(Lactpbacillus)和相关菌的鉴定，它是由49种可发酵碳水化合物的API 50 CH试验条组成的简易培养基。以测定菌制成悬液接种试验条的每一个小管。当培养时，由于发酵碳水化合物产酸，pH下降，使指示剂变色。结果构成菌株的生化图谱，并用于鉴定或分型。

试剂

一套(10次测定)包括：

- 10 个API 50 CHL培养基的安瓿

- 1份说明书

附加产品(不包括在套装产品内)：

- API 50 CH 试验条(ref. 50 300)

- McFarland 标准(ref. 70 900)点2或光密度计： DENSIMAT(ref. 99 234)

- 鉴定软件（请联系生物梅里埃索取有关资料）

- 吸管或PSI管(ref. 70 250)

- 矿物油(液体石腊) (ref. 70 100)

- 安瓿架 (ref. 70 200)

- 无菌棉拭子 (ref. 70 610)

- MRS 培养基

- 悬液基物2 m l (ref. 70 700) 和5 ml (ref. 20 150)

乳酸杆菌鉴定试剂盒API50CHL操作方法：

选取菌落

l 检查菌株的纯度。

l 接种菌株于MRS培养基上，30或37℃厌氧培养24小时。培养温度取决菌株原来的生长温度。

l 检查菌株归属于乳酸细菌群：革兰氏(+)，接触酶(-)，非芽孢厌氧(兼性或专性)的杆菌，能生长在MRS琼脂上。

如果使用贮存菌株(干冻或传代培养)在MRS肉汤传代2次后始接种於MRS琼脂。

接种物的制备

l 用光密度计 ：

- 按“警告和注意事项”(无滴头安瓿) 所示，打开API 50 CHL 培养基。

- 挑取几个一致的菌落，在API 50 CHL 培养中制得混浊度相当于2  McFarland 的菌悬液。

l 不用光密度计：

- 按“警告和注意事项”(无滴头安瓿)所示，打开悬液基物(2 ml) 的安瓿或用不含杂质的无菌蒸 馏水试管。

- 用无菌棉签挑取培养物上所有的细菌在管中制成浓的菌悬液(S)。

- 按“警告和注意事项”(无滴头安瓿) 所示， 打开悬液基物 (5ml) 的安瓿，加入几滴上述浓菌 (S)制得相当于2 McFarland浊度的菌悬液，记录滴数(n)。

- 按“警告和注意事项”所示，打开API 50 CHL培养基的安瓿，加2倍(2n)该菌液接种。

l 均匀。

试验条的接种

l 用巳接种的API 50 CHL 培养基加入验条的管(不加杯)，并用油覆盖所有的测定。

l 于30℃或37℃好养培养 48小时。

判读试验条

(见API 50 CH说明书)

l 在培养24和48小时后读。

l 阳性结果：培养中所含溴甲酚紫指示剂变黄所示的产酸作用。

七叶灵测定(25号管)从紫变黑。

l 记录于结果报告单。

所得该株菌的生化谱可用於：

l 用鉴定软件包鉴定菌株。

l 根据记录可与已鉴定的种比较。

与其它生化谱作分类研究。