与当前方法比较

什么是转染？

转染是将遗传物质输送到细胞中的过程。从广义上讲，有两种主要方法：  转染（非病毒）与转导（病毒性的）。

到目前为止，常见的基因编辑方法是通过使用病毒载体（即使用病毒将 DNA 传递到细胞内），也称为转导。病

毒载体有在患者中引起严重免疫反应的风险，在过去的几项临床试验中，许多死亡都归因于此。然而，病毒载体也

带来了巨大的制造挑战，因为除了细胞作为起始材料外，生产过程还必须考虑到高度复杂的病毒载体原材料。许多

行业参与者现在认识到，长期、成功的非病毒转染方法对制造的挑战将更小。 

因此，转向非病毒转染方法，特别是电穿孔（向细胞施加电场以增加细胞膜的通透性，允许将 DNA 引入细胞）在

制造能力方面正在积聚动力：提高可重复性和质量控制。近年来，电穿孔变得越来越流行，因为它在转染较大的基因

编辑时比病毒转导更有效，

这在使用 CRISPR 技术时也更常见。市场上十分受欢迎的电动工具之一是Lonza 的 Amaxa Nucleofector。然而，电穿孔仍然存在挑战，特别是原代细胞，如 T 细胞、B 细胞或干细胞，难以转染。

确定转染效率的问题

电穿孔后，细胞通常被镀在 96 孔板中。1-2 天后，成功转染的细胞开始表达感兴趣的受体。这些细胞受体用

荧光染料/染色剂或磁珠标记，使荧光流式细胞仪能够分析和量化成功转染（即基因工程）的细胞。