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流式细胞分析仪
流式细胞分析仪 流体动力学平台
虽然基于图像的分析近年来受到了广泛关注,但这种方法存在许多缺点:
基于图像的分析的挑战:
需要手动调整: 染色调整通常需要从背景图像中获得更好的细胞分辨率。高浓度的台盼蓝会导致背景噪音并干扰仪器正确分析和区分细胞的能力。
半自动: 用户必须先对细胞进行染色,然后再将细胞样本装入载玻片或试剂盒。
每次检测的高成本:由于每台仪器都有一个特定于该仪器的腔室、载玻片或试剂盒,因此终用户与每次检测的高耗材成本有关。
大量的成像数据: 基于图像的分析的进步包括基于图像的细胞仪(在流动环境中单细胞显微镜的高分辨率成像)。虽然近年来很受欢迎,但这些仪器在处理需要处理的大量图像数据时面临计算挑战,这限制了它们在临床应用中的使用。
流式细胞术
流式细胞术方法涉及使细胞一次一个地流过光源(例如激光)和检测器。当细胞通过光源时,检测器收集散射光并进行分析。细胞用荧光染料标记,导致吸收和发射不同波长的光。根据发射光的波长,可以测量标记细胞的不同特性。
流式细胞术的挑战:
复杂的仪器: 大多数流式细胞仪是相对复杂的仪器,对于简单的细胞计数和活力分析等应用来说过于复杂。虽然现在市场上有更多的台式流式细胞仪,但许多仍局限于由技术人员操作的流式细胞仪核心设施。
仪器成本高: 由于流式细胞仪能够进行多参数分析(包括细胞器、细胞核、DNA、RNA、染色体、细胞因子、激素和蛋白质含量等细胞成分分析);与简化的基于图像的分析仪器相比,这些仪器的价格要高得多。
在细胞被培养用于其他目的(例如进一步的实验)或细胞本身就是产品(例如细胞疗法)的情况下,
细胞计数尤其重要。根据细胞所接触的实验或细胞制造过程,细胞活力可能会受到影响。这意味着通
常在整个实验或过程的各个点检查细胞活力。
影响细胞活力的因素包括:
压力: 从细胞分选机中分配细胞会导致压力大幅下降(通常称为“爆炸性减压”),这会影响细胞活力。
温度: 需要仔细计划可能导致温度升高的实验(例如 3D 细胞打印所需的某些生物材料),以避免将细胞
暴露在高温下。
提供足够的营养物质: 长时间剥夺细胞获取营养物质的实验可能会对细胞健康产生不利影响。
接触有毒物质: 所有物质(包括药物)在获得批准之前必须通过的关键测试。因此,毒性筛选(“毒物筛选”)是一
个巨大的研究领域,细胞有目的地暴露于不同浓度的物质中,以确定其影响细胞活力的水平。对于新的药物疗法以
及确定家庭日常化学品的安全使用很重要。
剪切力:由流通池壁或针壁引起的力 - 与压力相比,这些力的影响往往较小。
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