传统细胞计数和活力分析：细胞染色

传统上，细胞计数和活力分析是通过对细胞进行染色来进行的。DAPI (4', 6-diamido-2-phenylindole) 和 Hoechst 是细胞计数常用的染色剂或染料。它们染色活细胞和死细胞的细胞核并呈现 蓝色。  

细胞活力染色 的一个常见例子 包括：

用绿色染料 (Calcein AM)染色的活细胞和

带有红色染色的死细胞（碘化丙啶）

现在有一系列细胞活力染料可供选择，包括用于死细胞的台盼蓝（蓝色染料）和用于死细胞的赤藓红 B（粉红色染料）。  

细胞染色问题：

• 耗时：  细胞染色的手动步骤。根据使用的细胞染色试剂盒或染料，完成细胞染色的样品制备可能需要长达一小时。

• 染色剂会影响细胞功能： 添加染色剂本身会影响细胞功能。  

血细胞计数/血细胞计数

血细胞计数是计数室，它们已被细胞生物学家使用超过 100 年。尽管近引入了半自动化方法，例

如此处描述的方法（即图像分析和流式细胞术）；血细胞计数仍然是全球许多细胞生物学实验室的支柱。

但是基于血细胞计数的细胞计数反复出现的挑战导致这些方法逐渐被替代。

血细胞计数细胞计数的挑战：

• 人为错误：  手动计数意味着这在过程的多个阶段是不可避免的，包括混合、处理和稀释。  

• 耗时：  由于该过程的手动性质，它不适合大规模分析或需要高通量细胞分析的过程。

• 重现性差：由于需要多次计数以确保一致性，因此通常会导致重现性差，尤其是在细胞样本的

• 用户

• 对用户测试中。

• 材料变化：  由于这是一种 DIY 方法，每个研究人员将使用不同的缓冲液、不同的移液器，这些差异

• 可能会导致更多不必要的错误。

基于图像的分析

随着近年来计算机处理能力的提高，基于计算机的图像流式细胞仪的兴起也是如此。借助更强大的机器学习和图像分析算法，计算机现在可以定量分析细胞图像，检测人眼可能无法检测到的特征。依赖这种方法的仪器包括数码相机（拍摄细胞图像）和分析图像的计算机程序。相机必须拍摄具有“细胞聚焦” 的高质量图像 - 高质量的图像更容易让计算机算法进行分析。因此，这些设备通常 具有手动对焦或自动对焦设置 - 这在拍摄图像之前确保细胞处于焦点位置。为了确保在相机前正确呈现细胞样本，这些仪器通常使用仪器专用的专业载玻片或墨盒。

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