原代细胞质粒DNA转染试剂

货号：T2120

存储条件：: 4-8℃保存，有效期一年。每次使用之前请先将本品上下颠倒混匀。

产品说明：

LabFect Plasmid原代细胞小核酸转染试剂是专门用于原代细胞质粒DNA转染的转染试剂。LabFect Plasmid 具有非常卓yue的转染性能，可高效转染多种原代细胞，转染效率高达70% 以上（EGFP质粒）。LabFect Plasmid不仅可转染较大分子的质粒DNA，还可转染RNA和小分子DNA。与目前市场上常见的脂质体转染试剂不同，LabFect Plasmid 采用生物可降解材料配制，对细胞的毒性很低，转染后细胞死亡率不到10%。LabFect Plasmid 使用也非常方便，先将转染试剂与质粒DNA混合，再将转染试剂-DNA复合物直接加入培养细胞中，血清不影响其转染效果，不必刻意添加或更换培养液，操作十分简便。。

产品特点：

卓yue的细胞转染性能：可高效转染多种原代细胞，转染效率高达70%以上；

极低的细胞毒性：使用可降解生物材料，细胞毒性低，转染细胞死 亡率不到10%，大大降低了因细胞毒性对实验结果的影响，实验结 果更为客观；

操作简便，可用于含血清培养基培养细胞的转染，转染前后不需要更换培养液。

注意事项：

因细胞密度随细胞系不同会有很大差别，且细胞密度直接决定转染效率，因此请在转染过程中尽量保持同样的接种比例，以提高转染重复性。多数哺乳动物细胞应在37℃、5%CO2条件下培养。其他的一些细胞系，例如昆虫细胞，需要在不同的温度和CO2浓度下进行培养。请根据具体细胞系选择最shi培养条件。应避免包装反应体系中存在血清，因血清会干扰LabFect与DNA形成复合物 。如果转染DNA量较大或者当复合物包装时反应体系中出现沉淀时, 请将包装反应体系调整至1ml进行。

适用细胞系：大鼠肝细胞、血管平滑肌细胞、血管内皮细胞、肺泡上皮 细胞、乳腺癌细胞、肺癌细胞、大肠癌细胞、肝癌细胞等

试剂盒内容物：LabFect原代细胞小核酸转染试剂

方法步骤（以24孔板转染为例）:

1. 细胞接种:

a. 转染前24小时左右对细胞进行铺板（不含抗生素），培养过夜； 

b. 确保转染时细胞密度达90%-95%。 

2. LabFect/DNA复合物包装(该步完成后应立即转染):

a. 在1.5 ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基，并添加适量的转染试剂(参见附表) 。用移液器轻轻混匀后在室温静置5分钟。 

b. 在1.5 ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基，并添加适量的 DNA，用移液器轻轻混匀后在室温静置5分钟。 (参见附表。首ci使用建议在附表提供的DNA和转染试剂参考量的基础上进行优化实验，以摸索两者之间的最you搭配比例)。

c. 将LabFect-培养基混合物滴加至DNA-培养基混合物中，用移液器 轻轻混匀后在室温静置15~20分钟后，立即转染。注意： LabFect-培养基混合物和DNA-培养基混合物的混合次序非常重要，切勿颠倒。 

3. 转染:

注意：LabFect在*培养基中(基础培养基中添加血清)具有最gao的转染效率，因此转染前后不需要换成无血清培养基。 a. 如特殊情况，可在转染开始之前更换新鲜的含血清培养基，以防转染后孵育阶段细胞密度太大、营养不足导致的细胞死亡。

b. 将步骤2制备的复合物滴加至培养基中。轻轻晃动培养皿以使复合物均匀分布。

c. 培养4h后，加入1ul溶液A，轻摇混匀（此步可选，溶液A另购）。

d. 过夜培养24~48小时。

e. 注意:如果转染后需要更换新鲜培养基，请于加入LabFect/DNA复合物12~24小时后进行。培养基更换后，孵育24~48小时后再进行后续实验。

f. 收获细胞，进行后续实验。

质量控制

本产品经严格的质量检验证明，无生物污染

注意：

本产品仅用于科研实验

附表：不同培养体系推荐初始转染条件