LabFect原代细胞小核酸转染试剂

货号：T1014

存储条件：蓝冰运输，4°C保存，超一个月不用于-20°C储存，避免反复冻融。-20℃保存条件下，有效期为1年。

产品说明：

LabFect可用来转染 siRNA、antisense RNA、microRNA等200bp以内的小分子RNA和DNA，可转染绝大多数原代细胞。 目前，无论国外还是国内，原代细胞的核酸转染都是个热点难题，市场还缺乏真正有效的商品化的原代细胞核酸转染试剂。LabFect能够高效转染绝大多数原代细胞，获得比较理想的基因敲除效果。甚至对一些活体寄生虫幼虫，LabFect也能获得较为理想的转染结果。对于大多数原代细胞，LabFect的细胞转染阳性率都在80%以上，而转染细胞死亡率不到10%。LabFect的使用也极其简便，先将siRNA与LabFect室温混合，再将siRNA-LabFectPM混合物直接加入含培养基的细胞，血清对转染效果没有影响，不必刻意添加或更换培养液。

产品特点：

卓yue的原代细胞转染性能：细胞转染阳性率一般在80%以上，基因敲除效果明显，肝细胞 Lamin A/C 基因敲除效率在95%以上；

极低的细胞毒性：转染细胞死亡率不到 10%，大大降低了因细胞毒性 对实验结果的影响；

转染细胞范围广，绝大多数原代细胞都能获得比较理想的转染结果。

应用：

siRNA 转染

antisense RNA 转染

200bp 内的小分子 DNA 转染

操作步骤：

本说明书适用于24孔培养板的转染实验，其他规格的培养板的用量参照下面表格，表格给出的是每孔的用量与体积。

1. 细胞接种：

转染前一天接种细胞，每孔500μl培养基，使细胞在转染时密度在30-50%，尽量不要使用抗生素。

2. siRNA-LabFect混合物准备：

a. 6pmol siRNA用50μl无血清培养基稀释。

b. 2μl LabFect 用50μl无血清培养基稀释。轻轻混匀，室温孵育 5min。注意：确保在25 min内执行第三步操作，不要过于延迟。

c. 孵育5min后，将siRNA稀释液与LabFect稀释液混合（总体积100μl）。轻轻混匀，室温孵育20 min。

3. 将混合物加到培养的细胞内（*培养基培养）：

a. 将100μl混合物加入培养孔内，培养孔内含有0.5ml培养的细胞。轻轻晃动培养板，混匀。

b. 37°C 培养 18-72h，检测基因抑制效果。如果需要，细胞培养 4-6h 时可以更换培养基，但不是必须。孵育时间的长短，取决于细胞类型、 所干扰基因本身及分析方法。可设置不同的孵育时间进行实验以确定最jia孵育时间。

转染实验优化：

为了提高转染效率，最hao对转染条件进行优化，特别是首ci使用。例如：24孔培养板，调整siRNA与LabFect试剂的用量。siRNA用量在0.6-30 pmol (final concentration 1-50 nM)之间调整，LabFect试剂用量在1.0-3.0μl之间调整。

转染实验要点：

转染过程尽量不要使用抗生素，否则会导致细胞死亡增加； 首ci实验 siRNA 的用量设置在终浓度 10nM、30nM、50nM、100 nM 进行摸索 ，后续实验根据实验结果修改。

质量控制

本产品经严格的质量检验证明，无生物污染

注意：

本产品仅用于科研实验

LabFect Transfection Reagent Formats for Various Cell Culture Vessels