产品货号：M1051

储存条件：4℃保存

产品组分

产品简介

MBP标签蛋白纯化试剂盒能够纯化带有麦芽糖结合蛋白(MBP)标签蛋白。MBP可促进连接蛋白的正确折叠，增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。Dextrin Beads 6FF 可以一步纯化 MBP 融合蛋白，结合的融合蛋白可以用10 mM 麦芽糖进行温和洗脱，保护了标签蛋白的活性。如果要去除 MBP 融合部分可用位点特异性蛋白酶切除。

注意事项：

1、试剂盒中的Dextrin Beads 6FF体积5ml为beads体积，总体积10ml（保护液为20%乙醇溶液）使用前需要充分混合均匀；

2、请勿在-20ºC或更低温度冷冻保存Dextrin Beads 6FF。

3、若离心不能wan全除去蛋白样品中的不溶物，可以将样品溶液用0.45µm的滤膜过滤。

4、若使用本说明书提供的条件无法达到理想的纯化效果，可尝试改变洗杂液和洗脱液中咪唑的浓度和(或)pH。

5、请穿实验服戴一次性手套操作。

实验步骤

1. 样品准备 

样品在上样前建议离心或用0.22μm 或 0.45μm 滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。

2. Dextrin Beads 6FF  装填

重力柱的装填

1) 取3ml AC层析空柱，纯水浸泡垫片后，装入下垫片（偏小的垫片），加入适量纯水润洗柱管和垫片，关闭下出口。

2) 将 Dextrin Beads 6FF 混合均匀，用枪头吸取适量填料加入至重力柱中(介质实际体积占悬液的一半)，打开下出口流干保护液。

3) 加入适量纯水冲洗介质，待柱管中液体重力流干后，关闭下出口。

4) 装入润洗后的上垫片，确保垫片与填料之前没有空隙，且保持水平。

5) 装填好的重力柱可以直接加入平衡液进行平衡，暂不使用时则加入保护液，2-8℃保存。

3.样品纯化

Dextrin Beads重力柱使用：各溶液用量均按照柱体积计算（例如：2 个柱体积，1 ml 规格对应为 2 ml 溶液，5 ml 规格对应为 10 ml 溶液）。整个纯化流程大约需要 30 min（主要取决于样品体积和溶液的粘稠性），操作快捷。

1) 将 Dextrin Beads 6FF 重力柱固定在铁架台上，依次去掉下端塞和上端塞，流干重力柱的保护液。

2)  向柱管中加入 5 个柱体积的平衡液，进行平衡 ，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。

3) 将样品加到平衡好的重力柱中，样品保留时间至少 2 min，保证目的蛋白与介质充分接触 ，提高目的蛋白的回收率。收集流出液，用于 SDS-PAGE 分析蛋白质的结合情况，在出现问题时，更方便寻找解决问题的方案。

4) 用 10-15 倍柱体积的洗杂液进行清洗 ，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。

5) 使用 5-10 倍柱体积的洗脱液进行目的蛋白的洗脱 ，分段收集，每一个柱体积收集一管，分别检测，既可以保证所有结合的目的蛋白被洗脱，又可以得到高纯度和高浓度的蛋白。

6) 依次使用 3 倍柱体积的平衡液和 5 倍柱体积的去离子水平衡填料。将重力柱保存在等体积的 20%乙醇中，置于 2-8℃保存，防止填料被细菌污染。

4. SDS-PAGE 检测

将使用纯化产品得到的样品（包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分）以及原始样品使用 SDS-PAGE 检测纯化效果。

5. 在位清洗

Dextrin Beads 6FF 纯化产品可以重复使用而无需再生，但随着非特异性结合的蛋白的增多和蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量都下降，需要进行在位清洗操作（Cleaning-in-Place，CIP）。

3 倍柱体积的去离子水；

3 倍柱体积的 0.1% SDS 或 0.1 M NaOH 溶液；

3 倍柱体积去离子水，20%乙醇 2-8℃保存。