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酵母焦磷酸酶试剂纯化自重组 E. coli 菌株,携带有从酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)克隆的 ppa 基因和蟾分枝
杆菌(Mycobacterium xenopi)GyrA 内含肽的融合基因。该焦磷酸酶催化无机焦磷酸盐水解生成正磷酸盐
:P207–4 + H20 →2HP04–2。在核酸扩增实验中,其可解除生成的无机焦磷酸盐对反应体系的抑制。
组分
组分名称数量
Yeast Pyrophosphatase (0.1 U/μl)200 μl/1 ml
应用
反转录反应中提高 RNA 产量
增强 DNA 复制
活性定义
1 单位指标准反应条件下(20mM Tris-HCl,pH 7.5,2mM MgCl2,2mM PPi,25℃ 反应 10 分钟)每分钟催化无机焦磷酸盐生成1μmol 磷酸盐所需的酶量。
储存
-20℃可保存3年。
使用注意事项
(1) 该酶在多种反应Buffer中均具有活性,通常该酶在HDA扩增、LAMP扩增等实验中,可直接接入即可。
(2) 该酶的用量在不同的实验中需要优化,通常在0.05~1U/ml浓度调整。
(3) 该酶的最佳反应温度为25℃,其在16~37℃均有活性,65℃ 10min可使该酶失活。
酵母焦磷酸酶试剂恒温扩增使用策略及实例展示
应用实例1:在以A3824-03或 A3828-03,用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板,1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果,可以看到检测反应<20min(达平台期)。
应用实例2: 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略,在反应结束后,倒置反应管,溶解管盖上染料后,阳性样本呈现出醒目的绿色,阴性表现出橙色,区分明显。且该方法不受样本类型限制,杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板,1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。
应用实例3:A3825-01 红黄变色反应(肉眼观察)
以 体外转录 RNA 为模板,1-6分别为1、10 、100、1000、104和106Copy,NTC为ddH2O为模板。 上图为加样结束反应起
始前,下图为 65 度反应 30min 后。
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