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蔗糖磷酸化酶试剂(Sucrose Phosphorylase)属于糖基水解酶13家族,是一种催化转移葡萄糖苷键的酶,能够催化蔗糖和无机磷酸
盐合成1-磷酸-葡萄糖。该酶主要以蔗糖、1-磷酸-葡萄糖为供体,多类物质如多羟基的糖和糖醇、酚羟基、羧基等为受体,
催化合成各种糖苷。该蔗糖磷酸化酶通过重组制备而得,其催化蔗糖(sucrose)的磷酸化反应,生成
D-fructose和α-D-glucose-1-phosphate,反应式为: Sucrose+Pi=α-D-glucose-1-phosphate+D-fructose。
该蔗糖磷酸化酶的比活>100U/mg,该酶通过改造可耐热,反应温度可在30~65℃进行,最佳反应温度为55℃。在60℃孵育
60h后活性损失<30%。
组分
组分名称数量
Sucrose Phosphorylase (0.5 U/μl)500 μl
活性定义
1单位指在37°C,pH 7.6条件下,每分钟由蔗糖催化生成1.0 μmole的D-fructose所需的酶量。反应缓冲液为100mM KH2PO4,200mM Sucrose,pH7.6。
储存
-20℃可保存2年。
蔗糖磷酸化酶试剂恒温扩增使用策略及实例展示
应用实例1:在以A3824-03或 A3828-03,用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板,1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果,可以看到检测反应<20min(达平台期)。
应用实例2: 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略,在反应结束后,倒置反应管,溶解管盖上染料后,阳性样本呈现出醒目的绿色,阴性表现出橙色,区分明显。且该方法不受样本类型限制,杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板,1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。
应用实例3:A3825-01 红黄变色反应(肉眼观察)
以 体外转录 RNA 为模板,1-6分别为1、10 、100、1000、104和106Copy,NTC为ddH2O为模板。 上图为加样结束反应起
始前,下图为 65 度反应 30min 后。
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