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AnnexinV-FIYS/PI细胞凋亡检测试剂盒基本特征之一,它在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定等方面起着十分重要的作用。
AnnexinV是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的磷脂酰
(Phosphatidylserine,PS)高亲和力特异性结合。以标记了FITC的 AnnexinV作为荧光探针,利用流式细胞仪或荧光显微镜
可检测细胞凋亡的发生。
Propidium iodide(PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但凋亡中晚期和死细胞由于细胞膜破裂,因此PI能够将
细胞核染红。将AnnexinV与PI联合使用,可以区分活细胞(FITC/PI均为阴性)、凋亡早期 细胞(FITC阳性、PI均为阴性)、
凋亡晚期或死细胞(FITC/PI均为阳性)。
本细胞凋亡检测试剂盒使用改进型的高纯度FITC染料,其在红色通道(690nm)无发射光,因此极大的减少了对红色通道的
干扰。使用该试剂盒进行细胞凋亡检测时荧光相互干扰更小、检测更准确。
组分
组分名称数量(20T/100T)
Annexin V-FITC100 μl/500 μl
PI Staining Solution100 μl/500 μl
10×Annexin V Binding Buffer20 ml
应用
细胞凋亡检测
储存
2~8℃,有效期1年。
注意事项
1. 整个操作过程动作要尽量轻柔,勿用力吹打细胞,尽量在4℃下操作。
2. 反应完毕后请尽快检测,反应1 小时后荧光强度就开始衰变。
3. Annexin V-FITC 和 Propidium iodide 是光敏物质,在操作时请注意避光。
4. 试验操作过程中佩戴手套等防护用品。
5. 试验开始前将一定量的 10×Annexin V Binding Buffer 用超纯水(1:9)稀释至 1×备用。
AnnexinV-FIYS/PI细胞凋亡检测试剂盒恒温扩增使用策略及实例展示
应用实例1:在以A3824-03或 A3828-03,用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板,1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果,可以看到检测反应<20min(达平台期)。
应用实例2: 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略,在反应结束后,倒置反应管,溶解管盖上染料后,阳性样本呈现出醒目的绿色,阴性表现出橙色,区分明显。且该方法不受样本类型限制,杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板,1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。
应用实例3:A3825-01 红黄变色反应(肉眼观察)
以 体外转录 RNA 为模板,1-6分别为1、10 、100、1000、104和106Copy,NTC为ddH2O为模板。 上图为加样结束反应起
始前,下图为 65 度反应 30min 后。
雅吉生物是一家生物企业主营ATCC细胞,细胞系,原代细胞和培养试剂,重组蛋白,ELISA试剂盒、抗体、荧光定量PCR检测试剂盒更多产品欢迎咨询。