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蛋白组学技术服务之iTRAQ
iTRAQ(Isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation)是一种用于蛋白质组学研究中的同位素标记技术**。这种技术使得研究者能够同时对多达
8个不同样本中的蛋白质进行相对和绝对定量分析。iTRAQ技术自2004年由美国应用生物系统公司推出以来,已成为蛋白质组学研究的重要工具。下面将进一步探讨
iTRAQ技术的工作原理、主要特点及其在科学研究中的应用:
1. iTRAQ技术的工作原理
标签试剂结构:iTRAQ试剂由三部分组成:报告基团、平衡基团和肽反应基团。报告基团的质量分别为113Da、114Da、115Da、116Da、117Da、118Da、
119Da和121Da(对于8-plex试剂),平衡基团则通过不同的质量来确保所有标记肽段在一级质谱中具有相同的总质量[^1^][^2^]。
一级质谱:在不同样本中的同一肽段被不同iTRAQ试剂标记后,由于总质量相同,它们在一级质谱中表现为一个峰。这样可以将不同样本中的同一肽段在质谱图中
合并为一个信号,简化了后续的分析。
二级质谱:在二级质谱分析中,iTRAQ标签试剂化学键断裂,释放出报告基团的信号。这些信号的强度用于定量分析,而肽段碎片离子则用于定性分析。通过比较
不同报告基团的信号强度,可以获得不同样本中相同肽段的相对定量信息。
2. iTRAQ的主要特点
高通量:iTRAQ技术能够同时对多达8个样本进行定量分析,大大提高了实验通量。这使得研究者可以在单次实验中比较多个条件下的蛋白质表达差异。
高灵敏度:相比传统的二维凝胶电泳,iTRAQ能够检测到更低丰度的蛋白,并且能准确测量较小的蛋白变化(在1.3至1.6倍之间),从而提供了更高的灵敏度。
广泛的应用范围:iTRAQ不仅能够检测胞浆蛋白,还能检测膜蛋白、核蛋白等。无论是高分子量、酸性、还是碱性蛋白,iTRAQ技术都能有效地进行鉴定。
定性与定量同步:iTRAQ技术在一次实验中即可完成蛋白质的定性和定量分析,提高了实验效率。
3. iTRAQ技术的应用
医学研究:iTRAQ技术已广泛应用于肿瘤标志物的筛选,通过比较肿瘤组织和正常组织的差异蛋白,研究者能够找到潜在的诊断和治疗靶标。
药物作用机制:利用iTRAQ技术,可以筛选出与药物作用相关的蛋白,进而研究药物的作用靶点和机制。
疾病机理研究:iTRAQ技术有助于揭示疾病的发生和进展机制,发现新的生物学标志物,为疾病的预防和治疗提供新的思路。
综上所述,蛋白组学技术服务之iTRAQ在蛋白质组学研究中具有重要作用,其高通量、高灵敏度和广泛的适用范围使其成为研究蛋白质表达差异的重要工具。
从医学研究到药物开发,再到环境科学,iTRAQ技术的应用前景广阔。研究者能够更全面地了解蛋白质在不同生理和病理条件下的动态变化,从而为生命科学研究和
相关应用领域带来新的见解和机遇。