流式JC-1检测的检测原理

JC-1是一种广泛用于检测线粒体膜电位（ΔΨm）的荧光探针。在正常的线粒体中，JC-1聚集形成聚合物，发出红色荧光；而在线粒体膜电位降低时，JC-1不能聚集，以单体形式存在，发出绿色荧光。通过测量红色和绿色荧光的强度比值，可以评估线粒体的健康状况和细胞凋亡的早期事件。

流式JC-1检测实验操作步骤

  1.JC-1工作液的配制：首先将JC-1固体粉末溶解在DMSO中制备存储液，然后用缓冲液或培养基稀释至工作浓度。

  2.细胞染色：将细胞与JC-1工作液共同孵育，以允许JC-1进入线粒体并积累。孵育时间和温度根据细胞类型和实验要求而定。

  3.洗涤：孵育后，使用缓冲液洗涤细胞以去除未进入线粒体的JC-1。

  4.流式细胞仪分析：使用流式细胞仪检测细胞的红色和绿色荧光，通过设置合适的激发和发射波长（通常是488nm激发和525nm/590nm发射）来分析JC-1的荧光信号。

  5.结果分析：根据红色和绿色荧光的强度比值，评估线粒体膜电位的变化。线粒体去极化的细胞会显示较低的红色/绿色荧光比值。

实验中的关键点和注意事项

  1.在实验过程中应避免直接光照射JC-1，因为它对光敏感。

  2.孵育和洗涤步骤应在适宜的温度下进行，以保证JC-1能够有效地进入线粒体。

  3.使用流式细胞仪时，应选择合适的滤光片以区分红色和绿色荧光。

  4.应设置适当的阴性和阳性对照，以验证实验条件的有效性。

  5.实验后应尽快进行分析，以避免荧光淬灭。