双抗体夹心法的一些疑问

双抗体夹心法的一些疑问：

1.双抗原夹心法的原理:

    固相抗原吸附载体 + 血清（抗体）+ 酶结合物（抗原） =  抗原*抗体*抗原复合物；

    抗原*抗体*抗原复合物 + 辣根过物氧化酶 《过氧化氢催化》 = 蓝色络合物。

2.双抗体夹心ELISA如何筛选抗体zui适的包被浓度:

    采用棋盘滴定法，选择一个阳性标本和一个阴性标本，两者的差异性zui大，且阴性标本吸光值小于0.1-0.2，阳性标本控制在1左右。

3.ELISA中，若在96孔板包被抗体，抗体是被吸附在孔的底部还是内壁？

    洗涤时候不会被甩出去。因为在放水浴箱里孵育的那段时间里，血清已经跟杯子里的化学试剂起了反应，粘附在里面了，洗涤甩干只是洗去多余的液体而已。

4.加一抗前要不要洗板？

    一般的ELISA实验中封闭液同时也是一抗稀释液，这时就没必要洗板了。但是如果一抗稀释液同封闭液成分不同，则应该洗板，去除封闭液的游离成分。

5.为什么双抗体夹心法是检测抗原zui常用的方法？

1）将特异性抗体与固相载体联结，形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。 
2） 加受检标本，保温反应。标本中的抗原与固相抗体结合，形成固相抗原抗体复合物。 洗涤除去其他未结合物质。 
3） 加酶标抗体，保温反应。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。*洗涤未结合 的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。 
4） 加底物显色。固相上的酶催化底物成为有色产物。通过比色，测知标本中抗原的量。 

     双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原，但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原，因其不能形成两位点夹心。