对气相色谱仪校准方法的思考
1. 气相色谱仪的概述
气相色谱仪是由载气把样品带入色讲柱，利用样品中各组分在色谱柱中气相和固定相间的分配及吸附系数不同进行分离，并通过检测器进行检测的仪器。根据各组分在色谱柱中的保留时间和响应值进行定性和定量分析。该仪器由气路系统、进样系统、分离系统、温控系统、检测系统和数据处理系统组成。
2. 气相色谱仪校准要求
该仪器的计量性能应符合下表的要求：
检定项目 | 计量性能要求 | ||||
TCD | ECD | FID | FPD | NPD | |
载气流速稳定性（10min） | ≤1% | ≤1% | —— | —— | —— |
柱箱温度稳定性（10min） | ≤0.5% | ||||
程序升温重复性 | ≤2% | ||||
基线噪声 | ≤0.1mV | ≤0.2mV | ≤1pA | ≤0.5nA | ≤1pA |
基线漂移（30min） | ≤0.2mV | ≤0.3mV | ≤10pA | ≤0.5nA | ≤5A |
灵敏度 | ≥800mV∙mL/mg | —— | —— | —— | —— |
检测限 | ≤5pg/nL | ≤0.5ng/s | ≤0.5ng/s(硫） | ≤5ng/s(氮） | |
≤0.5ng/s(磷） | ≤10pg/s(磷） | ||||
定性重复性 | ≤1% | ||||
定量重复性 | ≤3% | ||||
仪器输出信号使用赫兹（Hz）为单位时，基线噪声≤5Hz，基线漂移（30min）≤20Hz | |||||
a. 微量注射器
量程：10 μL,最大允许误差士12%。
b. 铂电阻温度计
温度测量范围：不小于300 ℃，最大允许误差士0.3 ℃。
c. 流量计
皂膜流量计测量范围(0~100)mL/min，准确度不低于1.5级。
d. 气压表
测量范围(800~1 060)hPa，最大允许误差士2.0 hPa。
3.计量器具校准
（1） 环境条件
气相色谱仪应在室温为（5~35）℃，相对湿度：（20~85）%，室内不得存放易燃、易爆和强腐蚀性的物质，无机械振动和电磁干扰。
（2） 校准使用标准物质
名称 | 含量 | 相对扩展不确定度（K=2) | 用途 | 备注 | |
苯-甲苯溶液 | 5mg/ml，50mg/ml | ≤3% | TCD | 液体 | |
正十六烷-异辛烷溶液 | （10-1000）ng/μL | FID | |||
无水乙醇溶液 | 10ng/μL | FPD | |||
丙体六六六-异辛烷溶液 | 0.1ng/μL | TCD | |||
氮（氦，氢，氩）中甲烷： | (100-1000)μmol/mol | FID | 气体 | ||
(10-1000)μmol/mol | |||||
（3）气相色谱仪校准项目
a. 外观检测
b. 载气流速稳定性
c. 柱箱温度稳定性
d. 程序升温重复性
e. 基线噪声
f. 基线漂移
g. 灵敏度
h. 检测限
i. 定性、定量重复性
（4） 外观检查
用目测、手动法进行检查。
（5） 载气流速稳定性校准
a. 选择适当的载气流速，等待稳定后，用流量计连续测量7次；
b. 以7次测量平均值的相对标准偏差即为稳定性。
（6） 柱箱温度稳定性校准
a. 把温度计的探头固定在柱箱中部，设定柱箱温度为70 ℃；
b. 等待仪器温度稳定后，连续测量10 min，每分钟记录一个数据；
c. 然后计算柱箱温度稳定性。
（7） 程序升温重复性校准
a. 把温度计的探头固定在柱箱中部，选定初温60℃，终温200 ℃，升温速率10 ℃/min；
b. 待初温稳定后，开始程序升温，每分钟记录数据一次，直至达到终温；
c. 此步骤重复3次，计算出相应点的相对偏差，取其最大值为程序升温重复性。
（8） 热导（TCD）检测器
a. 噪声和漂移
设置检定条件，记录基线30 min，选取基线中噪声最大峰-峰高对应的信号值为仪器的基线噪声；基线偏离起始点最大的响应信号值为仪器的基线漂移。
b. 灵敏度
使用液体标准物质检定：设置好检定条件后，待基线稳定后，用微量注射器注人(1~2)μL，浓度为5 mg/mL或50 mg/mL的苯-甲苯溶液，连续测量7次，记录苯峰面积。使用气体标准物质检定：通人摩尔分数为(100~ 10 00)μmol/mol的甲烷气体标准物质，连续测量7次，记录甲烷峰面积。
计算灵敏度。
检测器有：电子捕获（ECD）检测器、火焰离子法（FID）检测器、火焰光度（FPD）检测器、氮磷（NPD）检测器，每个检测器都对应相应的标准物质，校准步骤都一样的。
（9） 定性和定量重复性校准
仪器的定性和定最重复性是使用标准物质连续测量7次溶质的保留时间和峰面积测量的相对标准偏差RSD表示，该相对标准偏差RSD即为定性和定量重复性参考值。
公司背景介绍：
华谱&泽恒是专注于为生物制药行业提供实验室仪器计量校准、GMP验证服务/3Q验证/设备确认/厂房验证的专业服务商。我们给制药客户解决的是一站式QC/QA/工程/验证等事业部的质控外包服务。
我们活跃于许多关键市场领域，从细胞/基因治疗领域、抗体药方向、干细胞治疗到疫苗生产等生物制药领域，一直以来都是围绕生物医药客户实现让“让制药体系更安全"为使命，提高服务的效率、降低行业的成本、践行好的客户服务体验。自主品牌：华谱（上海）检测技术有限公司、泽恒计量检测（北京）有限公司。
