酶联免疫吸附测定法 (enzyme-linked immunosorbent assay)，简称 ELISA，是用于检测体液中微量物质的固相免疫测定方法。它是一种特殊的试剂分析方法，是在免疫酶技术( immunoenzymatic techniques ) 的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术。那么你知道ELISA实验的关键点是什么吗？让我们一起来看看吧！
一、样本的储存
合适的保存环境可以确保生物样本在后续实验和研究中的可靠性和稳定性，样本长期保存建议在-80℃保存，1-2个月内在-20℃保存，开展检测时需分装后保存4℃，并建议当天短暂保存，单次使用后丢弃剩余部分。
为避免样本的蛋白质结构和活性受损，尽量避免多次冻融，冻融次数对检测结果的的影响是不容小觑的。经测试对比发现：有些因子冻融2到3次甚至已经降到非常低的含量水平，如大家经常关注到的炎症因子IL-1β、IL-15、IL-17、CXCL8等。
二、样本内外源性物质
免疫方法检测中，内源性等因素干扰(自身抗体、异嗜性抗体、人抗动物抗体及其他一些结合蛋白等)、脂血、交叉反应、一些分析前变异(标本溶血、标本被细菌污染、标本贮存过久、标本凝集不全和采血管中添加物等)、基质效应甚至检测设备的不同，均可对检测结果造成干扰，引起许多检测结果的假性升高或降低，包括激素、各类标志物、药物和病原微生物的血清学检测等。
科研人员应充分认识免疫检测中的各类干扰因素，在出现结果不符(包括检测结果与临床症状不符、检测预期与文献不符)时进行原因分析，如检测的样本类型是否与所选试剂盒匹配。
三、样本造模
生物学实验中影响造模成功的因素很多，需要综合考虑各种因素，以确保模型的可靠性和准确性：
设置对照：在实验造模中，设置对照可以帮助确定造模是否成功。例如，实验组和对照组在实验处理后表现出不同的生理或生化反应，则可以认为造模是成功的。此外，通过对照还可以评估实验的可靠性，例如评估实验结果的重复性和稳定性。
多学科验证：在生物学实验中，确定造模和对照是否成功需要考虑多个方面。如：观察实验动物病理症状、检测生理指标、检测生化指标、组织病理学检查、统计学分析等；
实验动物：不同种类的实验动物对模型的反应可能不同。例如，某些药物在小鼠和大鼠中的反应可能会有所不同。因此，选择适当的实验动物种类对于造模成功至关重要。
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