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ELISA实验的常见问题

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2024/8/8 14:43:46
  ELISA是分子生物学、免疫学和细胞生物学研究中常用到的实验操作之一,相信大家常常会有这样那样的实验问题。下面让我们一起来看看ELISA实验的常见问题都有哪些吧!
 
  1. 洗板不干净
 
  解决方法:
 
  ①充分洗涤:如果洗板的时间不够,会导致抗体残留,阴性对照会显色,尝试延长洗板时间,增加洗板频率,在洗液中添加表面活性剂Tween-20。
 
  在洗板时要保证每步都洗涤干净,充分拍板直至孔内没有明显的残留液体。
 
  ②避免交叉污染:弃去洗液和孵育的抗体时避免交叉污染,移液枪头尽可能一次性使用,拍板的滤纸不要反复使用。
 
  2. 显色液变质或者试剂过期
 
  解决方法:检查试剂盒有效期,或使用新的试剂盒并按照说明书要求保存试剂盒。每次用剩下的显色液最好不要回收,或者只回收洗净的容器装的显色液。
 
  3. 试剂稀释有误,检测抗体/酶结合物工作液浓度过高
 
  解决方法:按照说明书推荐的稀释倍数稀释抗体。
 
  4. 试剂盒组分未平衡
 
  解决方法:试剂盒每个组分都需要平衡至室温后进行实验。
 
  5. 混用其他试剂盒试剂
 
  解决方法:保证使用试剂盒内完整的一套试剂进行实验,不同品牌及不同批次间的试剂可能存在不匹配现象,不同批号的试剂不要混用。
 
  6. 蒸馏水受酶等污染
 
  解决方法:使用新鲜蒸馏水。
 
  7. 培养箱温度超过37℃或反应时间过长
 
  解决方法:孵育时间过长、温度过高可能会导致非特异性结合增加,从而造成本底增高。检查恒温箱,确保孵育温度稳定在37℃,按照说明书的反应时间进行孵育。
 
  8. 酶标板底部有污渍
 
  解决方法:在加完终止液之后,检测之前,用75%乙醇浸润的脱脂棉球擦拭酶标板底部,确认没有污渍之后再检测。
 
  9. 洗液被污染
 
  解决方法:洗液现配现用,长期放置会析出,也可能会污染,导致背景偏高。
 
  更多有关ELISA实验的常见问题,请联系天津益元利康生物科技有限公司!

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