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生化试剂试验步骤

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2024/9/4 12:20:57

生化试剂试验步骤有哪些 :


1、贴壁细胞用yí酶消化,离心收集。


2、细胞重悬于冰冷的PBS漂洗一次,离心收集。试验步骤2再重新作一边。


3、加入5mlDNA提取缓冲液,(10mmol/LTris-cl,0.1mol/LEDTA,o.5%SDS),混匀。


4、加入25ul蛋白酶K,使终浓度达到100ug/ml,混匀,50℃水浴3h,


5、用等体积的酚抽提一次,2500rpm离心收集水相,用等体积的(酚,异戊醇)混合物抽提一次,2500r/min离心收集水相


6、用等体积的,异戊醇抽提一次。加入等体积的5mol/L的LiCL,混匀,冰浴,10min.。


7、2500rpm离心10min.转上清于一离心管中。加入等体积的异丙醇。室温10min。2500rpm,离心10min。弃上清。


8、加入0.1倍体积3mol/L乙酸钠(PH5.2)与2倍体积-20℃预冷无水乙醇。-20℃20min。


9、12000r/min,室温离心5min。弃上清。将DNA溶于适量TE中。


(以上实验步骤可供各位老师参考.)



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