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大量DNA产物纯化试剂盒说明书

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2015/5/20 9:26:08

  

                               大量DNA产物纯化试剂盒说明书

 

MaxiDNA Purification Kit

 大量DNA产物纯化试剂盒

 

   目录号:  YJ0517

   保   存:  室温

 

 

   组分说明

 

                                         Cat.No.                  YJ0517

                                         KitSize                     50

                                        BufferPB                   60ml

                                        BufferPS                   15ml

                               BufferPW(concentrate)                10ml

                                        BufferEB                   10ml

                                     SpinColumnDL                   50

                                CollectionTube(2ml)                 50

  产品简介

 

      本试剂盒采用新型硅基质膜技术,通过快速简单的结合-洗涤-洗脱步骤即可从大量的 PCR 产物或酶反   应液(酶切,连接,探针标记等)中纯化 50 bp-50 kb 的 DNA 片段,纯化过程中可有效去除引物、寡核苷酸、酶等杂质,从而获得高纯度,高浓度,完整性好的 DNA 片段,回收率高达 90%。本试剂盒回收纯化的 DNA 可 直接用于测序、连接和转化、标记、体外转录等分子生物学实验。

 

注意事项

 

1.  本试剂盒可无选择性的回收溶液中所有 DNA 片段,如需选择性回收特定片段,同时去除其他不同大小片段,请选择我公司的胶回收试剂盒(YJ0524, 加 YJ2302,YJ0518 或 YJ0526)。

 

2.  *次使用前应按照试剂瓶标签的说明在BufferPW中加入无水乙醇。

 

3.  使用前请检查BufferPB是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀现象,可在37℃水浴几分钟,即可恢复澄清。

 

4. 回收率与初始DNA量和洗脱体积有关。

 

5. 所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

 

自备:无水乙醇,离心管

 

 

               操作步骤

 

    1.   估计DNA反应液的体积,加入5倍体积的Buffer PB,充分混匀(如DNA反应体系为100μl,则加 入500μlBufferPB,无需去除石蜡油或矿物油)。

 

      注意:在加入BufferPB后检测溶液的pH值,若pH值大于7.5,可向其中加入10-30μl 的3M醋酸钠(pH5.0),从而将pH值调到5-7。

 

    2.    柱平衡:向已装入收集管(CollectionTube)中的吸附柱(SpinColumnDL)中加入200μl Buffer PS,     12,000rpm(~13,400×g)离心2分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。

 

    3.   将步骤1中所得溶液加入到已装入收集管的吸附柱中,室温放置2分钟,12,000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。

 

注意:吸附柱容积为700μl,若样品体积大于700μl可分批加入 。

 

    4.   向吸附柱中加入650 μl Buffer PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12,000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。

 

 注意:如果纯化的DNA用于盐敏感实验(例如平末端连接实验或直接测序),建议加入BufferPW后静置2-5分钟再离心。

   5.  12,000rpm离心2分钟,倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟,以*晾干。

 

   注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。为确保下游实验不受残留乙醇的影响,建议将吸附柱开盖,置于室温放置数分钟,以*晾干吸附材料中残余的乙醇。

  6.   将吸附柱放到一个新离心管(自备)中,向吸附膜中间位置悬空滴加100 μl Buffer EB(pH 8.5),室温放置2分钟。12,000rpm离心1分钟,收集DNA溶液。-20℃保存DNA。

 

      注意:1)洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液,应保证其pH值在7.0-8.5之间(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)。

 

   2)为了提高DNA的回收量,可将离心得到的溶液重新滴加到吸附柱中,重复步骤6。

 

   3)洗脱体积不应小于50μl,体积过少会影响回收效率。

 

    4)如果使用TE洗脱,需要考虑其中含有的EDTA是否会影响后续的酶促反应。

 

    5)回收大于10kb的DNA片段时,BufferEB应在50℃水浴中预热,适当延长吸附和洗脱时间,可增加回收效率。

 

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