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瑞氏染色原理及作用

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2016/5/13 13:10:18

瑞氏染液由酸性染料伊红和碱性染料美蓝组成的复合染料,溶于甲醇 ,后解离为带正电的美蓝和带负电的伊红离子。瑞氏染色法就是用瑞氏染色液对细菌进行染色。那么瑞氏染色原理是什么?

    瑞氏染色原理

    瑞氏染料是由碱性染料美蓝( Methvlem blue )和酸性染料黄色伊红( Eostm Y )合称伊红美蓝 染料即瑞氏 (美蓝-伊红Y)染料。伊红钠盐的有色部分为阴离子,无色部分为阳离子,其有色部分为酸性,故称伊红为酸性染料。美蓝通常为氯盐是碱性的,美蓝的中间产物结晶为三氯化镁复盐,其有色部分为阳离子,无色部分为阴离子,恰与伊红钠盐相反。

    为了观察细胞内部结构,识别各种细胞及其异常变化,血涂片必须进行染色。瑞氏染色法是血细胞分析经典和常用的染色法。 细胞的各大种成分均由蛋白质构成,由于蛋白质是两性电解质,所带正电荷的数量随溶液pH而定。对某一蛋白质而言,如环境pH<pI,(pI为蛋白质的等电点),则该蛋白质在酸性环境中正电荷增多,易与伊红结合,染色偏红;相反,当环境的pH>pI,即在碱性环境中负电荷增多,易与美蓝结合,染色偏蓝。临床上常用缓冲液(pH6.4~6.8)来调节染色时的pH值,同时还应注意使用清洁、中性的玻片,的甲醇配制染液,以期达到满意的染色效果。

    瑞氏染色的染料配方浓度对细胞核着色程度适中,细胞核结构和色泽清晰艳丽,对核结构的识别较佳,但对胞浆着色偏酸,色泽偏红,对细胞浆内颗粒特别是嗜天青颗粒及嗜中性颗粒着色较差。

    瑞氏染液染色鉴定

    瑞氏或姬姆萨染色液鉴定:刚配好或放置一个月以上的染液可进行下列鉴定:

    1.取1滴染液于乳白玻板上,自行迅速扩散开,其颜色变紫红色,且有伪足形成。

    2.取1滴染液加1滴缓冲液,染液由深蓝色立即变为紫红色。

    3.取血片或骨髓片进行试染检查,观察染色后各类细胞的胞核、胞浆及颗粒着色情况,pH是否合适及染色合适时间。如有上述变化,表明染液合格,可供使用。

    以上为瑞氏染色原理,瑞氏染色是目前常用而又简单的染色方法。瑞氏试剂中之酸性伊红和碱性美蓝混合经化学作用后,变成中性之 伊红化美蓝,久置后,经氧化而含有天青。此三种染料分别和细胞核及浆中的NH3+和COO-等结合,使细胞核及胞浆着色。由于系中性染料,又有缓冲液调节酸碱度,所以细胞受染后,蓝红等颜色都较适中,核染质、胞浆及其中之颗粒显色较为清楚

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