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瑞氏染色的步骤

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2016/5/13 13:26:09

瑞氏染色是目前常用而又简单的染色方法。瑞氏染液由酸性染料伊红和碱性染料美蓝组成的复合染料,溶于甲醇 ,后解离为带正电的美蓝和带负电的伊红离子。瑞氏染色的步骤是什么?为了观察细胞内部结构,识别各种细胞及异常变化,血涂片必须进行染色。血涂片的各种染色方法大多是罗氏染色法衍变而来。目前常用瑞氏染色法。

    瑞氏染色的步骤

    瑞氏染液的配制:取瑞氏染料1.0g、甲醇600ml、甘油15ml。

    I液:将全部染料放入清洁干燥的乳钵中,先加少量甲醇慢慢地研磨(少半小时),以使染料充分溶解,再加一些甲醇混匀,然后将溶解的部分倒入洁净的棕色瓶内,乳钵内剩余的未溶解的染料,再加入少许甲醇细研,如此多次研磨,直染料全部溶解,甲醇用完为止。再加15ml甘油,密闭保存。

    说明:新鲜配制的染液偏碱,染色效果较差,经在室温下贮存一定时间,美蓝逐渐转变为天青B后方可使用,这一过程称染料成熟。放置时间愈久,天青愈多,染色效果也就越好。但必须盖严瓶口,以免甲醇挥发或氧化成甲酸。染液中也可加中性甘油3ml,防止甲醇挥发或氧化,同时也可使血细胞染色较清晰,但我们所用的甲醇必须纯净。

    II液:又称磷酸盐缓冲液(PH6.4-6.8),包含磷酸二氢钾0.3g,磷酸二氢钠0.2g、蒸馏水加1000ml。配好后用磷酸盐溶液校正PH,如无缓冲液可用新鲜蒸馏水代替。也可用蒸馏水代替。

    染色:

    ①血涂片自然干燥后,用蜡笔在两端画线,以防染色时染液外溢。随后将玻片平置于染色架上,滴加染液3-5滴,使其盖满血涂片,大约1分钟后,滴加等量或稍多的II液,用吸耳球轻轻混匀。

    ②冲洗:染色5-10分钟用流水染液,待干。

    ③结果观察,将干燥后的血涂片置显微镜下观察。先用低倍镜观察血涂片,再用油镜。

    瑞氏染色法就是用瑞氏染色液对细菌进行染色。瑞氏染色的步骤中需要注意的是冲洗时应以流水冲洗,不能先倒掉染液,以防染料沉着在血涂片上。冲洗时间不能过久,以防脱色。如血涂片上有染料颗粒沉积,可滴加甲醇,然后立即用流水冲洗。

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