2×PCR Mix

产品简介

2×PCR Mix中含有2×Taq DNA Polymerase，2×PCR Buffer，2×dNTP及PCR反应的优化剂和稳定剂，只需加入适量引物、模板和水即可进行PCR扩增。大大简化了PCR操作，使操作更加快捷，提高了效率；也减少了PCR操作过程中可能导致的污染，使PCR的重复性更好。

2×PCR Mix可以进行各种常规的PCR扩增，特别适合用于定量和半定量的PCR扩增。

试剂盒以外自备仪器和试剂
无菌双蒸水，模板，PCR管，可调移液器，PCR仪。

保存条件：

-20℃保存，一年有效。

注意事项：

1、  由于PCR反应非常灵敏可以扩增目的基因序列超过1000万倍，在使用Taq酶时请注意避免微量待扩增DNA的污染，并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。

2、  Taq DNA polymerase在PCR过程中每循环的出错几率约为2.2×10-5，对于大于1kb的DNA断的克隆*使用出错几率更低的DNA聚合酶，例如Pfu DNA polymerase。对于普通的PCR或RT-PCR定性检测或定量检测，Taq DNA polymerase是*选择。

3、  为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 

2×PCR Mix
操作规程

1、   使用前每个组份轻轻混匀，然后2000rpm离心20s。

2、 取灭过菌的0.2ml PCR管，参考如下表格设置反转录反应（50 μL反应体系）：

  注：对于不同类型的模板在50μl反应体积中*用量如下：

哺乳动物基因组DNA：0.1-1μg；大肠杆菌基因组DNA：10-100ng；质粒DNA：0.1-10ng。

过多的模板DNA容易导致非特异性的PCR产物

3、   轻轻混匀(可以用Vortex在zui低速度轻轻混匀或用移液器吹打混匀)，随后2000rpm离心20s沉淀液体。

4、   如果所使用的PCR仪有热盖则省略本步骤。如果PCR仪没有热盖，则在管内滴入一滴矿物油。

5、 各设置好的PCR反应管置于PCR仪上，开始PCR反应。

a、    PCR扩增条件参考：

  Step1(起始变性)：    94℃ 3min

Step2(变性)：        94℃ 30sec

Step3(退火)：        45～65℃ 30sec

Step4(延伸)：        72℃ 1min

Step5(循环)：        Go To Step2 for 25～35 cycles

Step6(zui终延伸)：    72℃ 10min

StepP6(临时保存)：   4℃ forever

b、   PCR反应的设置需根据模板、引物、PCR产物的长度和GC含量等条件的不同设定不同的PCR反应条件包括温度、时间、循环数及镁离子的浓度等。

c、 Step4(延伸)的时间设置需根据PCR产物的长度进行设置，通常每kb产物的延伸时间为1分钟。例如PCR产物的长度为1kb，则延伸时间可以设置为1分钟，PCR产物的长度为2kb，则延伸时间可以设置为2分钟，以此类推。

d、 对于初次进行的PCR，为尽量确保可以扩增出预期的PCR产物，可以把循环数设置为35。对于需进行半定量或定量的PCR反应循环数一定要进行适当优化，使PCR反应没有达到平台期。

6、   反应结束后，取反应液10μL进行琼脂糖凝胶电泳，确认PCR反应产物。如果此PCR产物需用于以后实验，应将PCR产物冷冻保存。 

2×PCR Mix

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