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BC5915-100T/96S 高铁螯合物还原酶活性检测试剂盒 微量法
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- BC5915-100T/96S
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北京索莱宝科技有限公司
（Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd. ）是一家从事生物学试剂及试剂盒的高科技生物企业。
总部位于北京，并在设有经销或代理机构。产品因可靠而稳定的质量和较为完善的售后服务确立了“Solarbio”良好的品牌形象。公司秉承“以客户为中心、以产品为保障、以诚信为基础、以创新为宗旨”的发展理念，拥有专业的研发和质量检测团队以及的仓储和物流系统。“Solarbio”已经得到科研工作者的认可，成为广大经销商推崇的。
公司拥有一批专业的研发人员，我们专注于生物产品的不断完善和创新。产品覆盖面广，品质可靠。先后开发了涵盖分子生物学、细胞生物学、免疫学、生物医学等领域的多种试剂及试剂盒。同时，索莱宝公司提供各种常规生化试剂，库存常备产品多达10000多种，可随时为广大科研工作者提供各类专业试剂。在质量方面，索莱宝谨记公司信念：质量高于一切。所有研发的产品都设有严谨的生产流程，科学的质量检测方法和成熟的质量检测程序，我们恪守对每一位用户的承诺：用专业的态度做专业的品牌。同时，公司组建了一支专业的技术服务队伍，能够为科研工作者提供专业的技术服务。每一位购买索莱宝产品的用户都能够得到专业的咨询和完善的售后服务。
索莱宝公司坚持与接轨，注重和企业的合作与交流，并提供产品代理、市场咨询等多项服务。公司将一如既往与世界更多合作，不断为广大生物科研工作者提供更优质的产品和服务。公司理念：“为科研服务，为生命尽责”。一个人能够走多远，取决于与谁同行。索莱宝公司期待与各同行精诚合作。
索莱宝诚招生物试剂研发人员，期待与广大同行精诚合作，为广大科研工作者提供优质的产品，高效的物流以及专业的售后服务。索莱宝感谢所有朋友的支持与帮助，您的支持是我们前进的动力和保障。让我们携手同行，共同创造美好的明天。
详细信息
高铁螯合物还原酶（FCR）活性检测试剂盒说明书
微量法
货号：BC5915
规格：100T/96S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
溶液的配制：
1、 显色液：临用前根据样本数量按照试剂一：试剂二：试剂三=50μL：50μL：50μL（150μL，1T）的比例配制显色液，充分混匀，现配现用。
2、 标准品：临用前加入0.71mL蒸馏水和10μL浓硫酸，配制成50μmol/mL Fe2+标准液。溶解好的标准品2-8℃可以保存2周。
3、 62.5nmol/mL标准溶液的配制：临用前取50μL 50μmol/mL Fe2+标准液和950μL蒸馏水混合配制成2.5μmol/mL 标准溶液；再吸取25μL 2.5μmol/mL（2500nmol/mL）和975μL蒸馏水混合配制成62.5nmol/mL标准溶液备用。
产品说明：
双子叶植物和非禾本科单子叶植物采用铁螯合还原反应的高效活化和吸收机制从土壤中获取铁。三价铁还原为二价铁后才能被植物吸收利用。在铁充足时，植物根部的三价铁氧化还原酶将Fe(III)-螯合物中的铁还原并将还原所得Fe2+转运通过细胞质膜进入根细胞内。高铁螯合物还原酶（Ferric chelate reductase，FCR，EC1.16.1.7）催化Fe3+还原为Fe2+，Fe2+和菲洛嗪形成紫色络合物，在562nm下有特征吸收峰。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、分析天平、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、浓硫酸（95%-99% AR）、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1. 组织样本：按质量（g）: 提取液体积（mL）1 : 5~10比例加入提取液（建议称取0.1g样本，加入1.0mL提取液），冰浴匀浆后，于4℃，8000g，离心10min，弃沉淀，取上清液置于冰上待测。
2. 液体样本：直接测定。若液体有浑浊则离心取上清测定。
二、测定步骤
1．可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至562nm，可见分光光度计用蒸馏水调零。
2．显色液临用前平衡至常温。
3．标准管测定
吸取50μL 62.5nmol/mL Fe2+标准液，加入150μL显色剂，充分混匀，测定562nm下的吸光度，记为A标准，此时Fe2+终浓度为15.625nmol/mL，标准管只需做1-2次。
4．空白管测定
吸取50μL蒸馏水，加入150μL显色剂，充分混匀，测定562nm下的吸光度，记为A空白，计算ΔA标准=A标准-A空白，空白管只需做1-2次。
5．操作表：（在微量玻璃比色皿或96孔板中以下试剂）
试剂名称（μL） | 测定管 |
样本 | 50 |
显色液 | 150 |
立即充分混匀后于微量玻璃比色皿/96孔板，562nm处测定10s时的吸光值A1，常温反应30min，测定30min10s时的吸光值A2，记录562nm下10s时吸光值A1和30min后的吸光值A2。计算ΔA=A2-A1。 | |
三、高铁螯合物还原酶（FCR）活性计算
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白在每mL体系中每分钟生成1nmol Fe2+定义为一个酶活力单位。
FCR活性(U/mg prot)= ΔA×C标÷ΔA标准×V总÷(Cpr×V样) ÷T=2.083×ΔA÷ΔA标准÷Cpr
（2）按样本质量计算：
单位的定义：每g组织在每mL体系中每分钟生成1nmol Fe2+定义为一个酶活力单位。
FCR活性(U/g 质量) =ΔA×C标÷ΔA标准×V反总÷(W÷V提取×V样) ÷T =2.083×ΔA÷ΔA标准÷W
C标：Fe2+标准液最终浓度，15.625nmol/mL；V反总：反应体系总体积，0.2mL；Cpr：上清液蛋白浓度，mg/mL；V 样：加入反应体系中上清液体积，50μL=0.05mL；V提取：加入提取液体积，1mL； T：反应时间，30min；W：样本质量，g。
注意事项：
1、 如果∆A小于0.010或测定管吸光值接近空白管，可以增加样本量或者延长反应时间后再进行测定；如果∆A大于1或者A1大于1，建议将样本上清用提取液适当稀释后再进行测定。注意同步修改计算公式。
实验实例：
1、 称取0.1214g樱桃番茄，加入提取液进行冰浴匀浆，按照测定步骤操作，用96孔板测得计算ΔA= A2-A1=0.665-0.127=0.538，ΔA标准=A标准-A空白=0.525-0.083=0.442，带入公式计算：
FCR活性(U/g 质量) =2.083×ΔA÷ΔA标准÷W=20.885 U/g 质量
2、 称取0.1002g闽南叶片，加入提取液进行冰浴匀浆，按照测定步骤操作，用96孔板测得计算ΔA= A2-A1=0.188-0.104=0.084，ΔA标准=A标准-A空白=0.525-0.083=0.442，带入公式计算：
FCR活性(U/g 质量) =2.083×ΔA÷ΔA标准÷W=3.951U/g 质量
参考文献：
[1] Shabnam N , Kim M , Kim H .Iron (Ⅲ) oxide nanoparticles alleviate arsenic induced stunting in Vigna radiata[J].Ecotoxicology and Environmental Safety, 2019, 183(Nov.).
[2 Kabir A H , Akther M S , Skalicky M ,et al.Downregulation of Zn-transporters along with Fe and redox imbalance causes growth and photosynthetic disturbance in Zn-deficient tomato[J].Scientific Reports, 2021, 11(1).
[3] Ojeda M , Schaffer B , Davies F S .Root and Leaf Ferric Chelate Reductase Activity in Pond Apple and
Soursop[J].Journal of Plant Nutrition, 2005, 27(8):1381-1393.
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