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MDCK犬正常肾细胞|MDCK细胞
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生产厂家青旗(上海)生物技术发展有限公司,总部位于上海浦东新区,依托本地高校资源,逐步发展成为以生物技术为主的研发、生产、培训为一体的综合化产业平台,公司在标准化细胞库建立及细胞药物前端模型方面成果显著。我们秉承对用户负责的态度,以对科研的高度严谨,以严格的质量控制,为广大生物医学科研用户提供更优质的服务!
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上海青旗生物科技有限公司是一批由美国留学归来的致力于服务中国生物领域的青年创办的一家新型公司。公司自创办以来,以优质的产品、快捷的速度和完善的售后服务,赢得生物界老师的厚爱,您选择青旗的理由: 产品齐全:囊括实验室仪器、设备、实验室耗材、免疫生物学试剂、动物生物学试剂、植物生物学试剂、微生物学试剂、细胞生物学试剂、遗传学生物试剂、生物化学试剂、分子生物学试剂。 品牌齐全:囊括国内外100多个知名品牌。 方便、快捷,订货周期短,选择服务质量好的快递,全称跟踪,及时到达您的手中。青旗生物努力打造生物领域内的京东商城。 平价:同等质量的产品,我们这里价格实惠,为您节省每一分钱。 优质的售后服务:实验过程,我们有技术全程跟踪指导,若有问题,我们*时间为您处理,保证您售后无忧。 多姿多彩的技术服务:免疫学技术服务、Western Blotting技术服务、实时荧光定量PCR(RealTime PCR)技术服务、病理学检测技术服务等。 总之,青旗生物是您值得信赖的地方:诚实正直,以客户的切身利益为出发点,关注客户,协助客户一起成长!
细胞名称:MDCK犬正常肾细胞|MDCK细胞
MDCK犬正常肾细胞特性:
1) 来源:MDCK犬正常肾细胞
2) 含量:>1x106 个/mL
3) 污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
4) 规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
5)培养基:90%RPMI-1640+10%FBS
6)生长特性:贴壁生长
运输和保存:使用含有优质胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞。收到细胞后,可在1000RPM,常温条件下,离心5min后,于洁净操作台弃去上清,加入推荐使用的培养基后转移至10cm培养皿或者T25培养瓶中培养,传代达到细胞生长状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
细胞用途:仅供科研使用。
MDCK犬正常肾细胞培养步骤
一.培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备基础培养基( GIBCO,,添加NaHCO3 1.5g/L,丙酮酸钠 0.11g/L);优质胎牛血清,10%。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%*培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二. 细胞处理:
1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2)MDCK犬正常肾细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。
MDCK犬正常肾细胞|MDCK细胞注意事项:
1.收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现象发生请及时和我们联系。
2.先不开瓶盖,瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置数小时(4h左右),稳定细胞状态,切忌在温箱内静置过夜。
3.静置后镜检,拍照,记录细胞状态。建议传代后也拍照记录细胞生长情况。
4. 悬浮细胞:将细胞瓶内液体都转移至无菌离心管内,1000 转/分钟离心5min,培养基上清可备用,管底细胞沉淀用培养基重悬。镜检时若细胞密度超过80%,可将细胞悬液分至2个细胞瓶内培养;若密度未超过80%,细胞悬液移至原瓶继续培养,待达到80%时再正常传代。备注:聚团生长慢,有密度依赖,必须使用T25培养瓶竖立培养,3天一次半量换液一次,1-2周传代一次。
贴壁细胞:若细胞密度超过80%,可正常传代;若未超过80%,收集细胞瓶内的培养基,留8ml继续培养至80%左右再传代,瓶盖可稍微拧松。备注:细胞贴壁慢,传代后细胞放2天不动。
5.细胞瓶内的培养基含血清和双抗,可收集后4℃保存备用,可补加2%血清。刚开始传代时建议一半用细胞瓶内的培养基,一半用客户自备的培养基,使细胞逐渐适应培养条件,以免因不适应而造成生长状态不佳。
6.因为MDCK犬正常肾细胞培养过程外因太多,所以我们的售后保障期为一周,超过一周的细胞我们会酌情处理,但不提供免费更换服务。ZYC3516 人肺动脉外膜成纤维细胞 HPAF 形态:贴壁,悬浮均有;上皮细胞样 培养条件:MEM/F12 +10% FBS
ZYC3517 人肺泡上皮细胞 HPAEpiC 形态:贴壁,悬浮均有;上皮细胞样 培养条件:MEM/F12 +10% FBS
ZYC3518 人支气管上皮细胞 HBEpiC 形态:贴壁,悬浮均有;上皮细胞样 培养条件:MEM/F12 +10% FBS
ZYC3519 人气管上皮细胞 HTEpiC 形态:贴壁,悬浮均有;上皮细胞样 培养条件:MEM/F12 +10% FBS
ZYC3520 人小气道上皮细胞 HSAEpiC 形态:贴壁,悬浮均有;上皮细胞样 培养条件:MEM/F12 +10% FBS
ZYC3521 人肺成纤维细胞 HPF 形态:贴壁,悬浮均有;上皮细胞样 培养条件:MEM/F12 +10% FBS
做细胞实验的同学看过来。原装ATCC细胞现货来啦。
选择上海青旗生物细胞有3个理由:
1、细胞状态好,形态佳,易成活,是市面上比较好养的细胞之一;
2、物流迅速,复苏好后发货,次日就能到;
3、使用我司推荐的进口品牌血清进行培养实验,效果更佳。
专业技术人员李工收藏的细胞培养小技巧:
1. 买细胞要去靠谱的地方买,比如 ATCC 或者青旗生物。一般上面会有针对细胞的介绍,这样培养之前可以了解细胞正常生长的状态图、传代、培养基的类型等。
2. 不管是买的细胞,还是别人惠赠的细胞,刚拿到手赶紧的做两件事:检测是否有支原体污染;迅速扩增冻存,冻存细胞复苏后第二天*更换一次培养基。
3. 发现细胞有污染迅速处理掉,特别是当你养了很多种细胞时。细菌污染、真菌污染很容易发现,支原体污染的话,细胞会长的慢,可以买个支原体检测的试剂盒定期检测一下。
4. 不同细胞生长周期不同。有的生长很快,比如说 MDA-MB-231,传代的时候取离心悬液的十分之一就已经足够了。有的又是特别慢,比如 BT474,传代是一分二,复苏起始的时候两周多才能长满。这就需要要在培养细胞的过程中多多摸索。
5. 对于娇弱的细胞,就得细心呵护。胰酶消化不能过久,吹得时候要轻柔,离心时候也要注意转速和时间。每天都要去看一下细胞,肉眼观察培养基状况、显微镜下观察细胞生长状况。记住,是每天。
细胞培养常见问题及解决方法
问题 | 原因 | 解决方案 |
细胞生长缓慢 | 生长培养基使用不当 | 按照生产商的建议,使用相应的预热生长培养基。 |
生长培养基中血清质量差 | 使用其他批次血清。 | |
传代操作不当 | 按照生产商的建议消化时间及传代比例进行操作。 | |
换液过于频繁 | 降低换液频率,参考生产商推荐的换液频率。 | |
细胞传代次数过多 | 使用传代次数较少的健康细胞。 | |
细胞生长超过汇合状态 | 哺乳动物细胞传代应在细胞处于对数期、未达到汇合状态时进行,建议细胞密度达 80-90%传代。 | |
细胞被支原体污染 | 将细胞、培养基和试剂丢弃;新取一只冻存细胞,并且使用新的培养基和试剂。 | |
细胞复苏存活率低 | 细胞冻存不当 | 新取一只冻存细胞,并储存在液氮中。将细胞储存在液氮中,直至复苏。 |
自行制备的冻存细胞无活性 | 将细胞按照生产商推荐的密度冻存。 | |
制备冻存细胞时使用传代次数少的细胞。 | ||
严格按照生产商推荐的操作程序冻存细胞。请注意本手册推荐的冷冻程序是冻存细胞的一般流程,只能作为指导原则使用。 | ||
新取一只冻存细胞。 | ||
细胞复苏方法不当 | 严格按照生产商推荐的操作程序复苏细胞。请注意本手册推荐的解冻程序是复苏细胞的一般流程,只能作为指导原则使用。 | |
确保冷冻细胞解冻迅速,接种前用预热的生长培养基缓慢稀释细胞。 | ||
复苏培养基使用不当 | 使用生产商推荐的培养基。确保培养基使用前已经预热。 | |
细胞稀释过度 | 按照生产商的建议,将解冻后的细胞高密度接种,以改善复苏效果。 | |
处理细胞时动作不够轻柔 | 冻存和复苏过程对大多数细胞都会造成不利影 响。不要通过涡旋振荡或者用力敲打培养瓶的方法使细胞脱落(培养昆虫细胞时除外),也不要高速离心细胞。 | |
冻存液中所用保护剂在储存过程中未避光 | 如果未避光储存,冻存保护剂会转变为对细胞有毒性的物质;新取一只冻存保护剂,重新冻存细胞。 |
★由于细胞库现有细胞类目多,为了不出现混乱错误,需要了解相关细胞价格及详细资料直接call,对您造成的不便还请见谅!
★注:如运输过程中导致细胞污染或者死亡,我们将无条件补发
收货后十个工作日内有其他问题提供照片可半价重发
最后,通过低温保藏储备一些细胞,以防支原体大面积来袭。如果支原体有抬头的迹象,或常规检测呈阳性结果,那么较可靠的补救措施是扔掉所有培养物,清洁培养箱和超净台,一切从头开始。当然,你得确保储备的细胞是不含支原体的。