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BMEC大鼠脑微血管内皮细胞|BMEC动物细胞

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细胞名称BMEC大鼠脑微血管内皮细胞|BMEC动物细胞

组织来源:大鼠脑微
培养条件:DMEM +10% FBS 
形 态:贴壁

BMEC大鼠脑微血管内皮细胞难以消化原因和解决方法:

可能原因1:消化液太弱了。

解决方法:增加酶的浓度或添加EDTA。另外可以尝试在37°C进行消化以增强酶的活性。

可能原因2: 培养液中含有抑制剂(例如血清为胰酶的抑制剂)可使消化液中的酶失活。

解决方法:在加入消化液前,用DPBS将细胞多洗涤几遍。

可能原因3: 细胞长满了并且很长时间没有得到及时处理,以至于细胞间连接非常紧密从而使消化液渗透不到培养容器与细胞的接触面。

解决方法:在细胞达到*汇合前进行传代。

BMEC大鼠脑微血管内皮细胞|BMEC动物细胞检测步骤:

1. 细胞样品的准备:

    收集细胞,用1ml预冷PBS洗1遍,轻轻弹击离心管底以适当分散细胞,避免细胞成团。

2. 细胞固定:

    加入1ml预冷的70%乙醇中,轻轻吹打混匀,4度固定2小时或更长时间(固定12-24小时可能效果更佳)。1000g离心3-5分钟,沉淀细胞(如果细胞沉淀不充分,可以适当延长离心时间或加大离心力)。弃上清,用用1ml预冷PBS洗1遍。

3. PI染色:

    每个样品用0.5ml染色缓冲液(或PBS)重悬,加入25ul PI染色液(20×)、10ul RNase A(50×)。37度避光温浴30分钟。

4. 流式检测:

    用流式细胞仪在激发波长488nm波长处检测红色荧光,同时检测光散射情况。采用分析软件进行细胞DNA含量分析和光散射分析。

 

做细胞实验的同学看过来。原装ATCC细胞现货来啦。 

选择上海青旗生物细胞有3个理由:

1、细胞状态好,形态佳,易成活,是市面上比较好养的细胞之一;

2、物流迅速,复苏好后发货,次日就能到;

3、使用我司推荐的进口品牌血清进行培养实验,效果更佳。

 

 

专业技术人员李工收藏的细胞培养小技巧:

1. 买细胞要去靠谱的地方买,比如 ATCC 或者青旗生物。一般上面会有针对细胞的介绍,这样培养之前可以了解细胞正常生长的状态图、传代、培养基的类型等。

2. 不管是买的细胞,还是别人惠赠的细胞,刚拿到手赶紧的做两件事:检测是否有支原体污染;迅速扩增冻存,冻存细胞复苏后第二天*更换一次培养基。

3. 发现细胞有污染迅速处理掉,特别是当你养了很多种细胞时。细菌污染、真菌污染很容易发现,支原体污染的话,细胞会长的慢,可以买个支原体检测的试剂盒定期检测一下。

4. 不同细胞生长周期不同。有的生长很快,比如说 MDA-MB-231,传代的时候取离心悬液的十分之一就已经足够了。有的又是特别慢,比如 BT474,传代是一分二,复苏起始的时候两周多才能长满。这就需要要在培养细胞的过程中多多摸索。

5. 对于娇弱的细胞,就得细心呵护。胰酶消化不能过久,吹得时候要轻柔,离心时候也要注意转速和时间。每天都要去看一下细胞,肉眼观察培养基状况、显微镜下观察细胞生长状况。记住,是每天。

 

 

细胞培养常见问题及解决方法

问题

原因

解决方案

细胞生长缓慢

生长培养基使用不当

按照生产商的建议,使用相应的预热生长培养基。

生长培养基中血清质量差

使用其他批次血清。

传代操作不当

按照生产商的建议消化时间及传代比例进行操作。

换液过于频繁

降低换液频率,参考生产商推荐的换液频率。

细胞传代次数过多

使用传代次数较少的健康细胞。

细胞生长超过汇合状态

哺乳动物细胞传代应在细胞处于对数期、未达到汇合状态时进行,建议细胞密度达 80-90%传代。

细胞被支原体污染

将细胞、培养基和试剂丢弃;新取一只冻存细胞,并且使用新的培养基和试剂。

细胞复苏存活率低

细胞冻存不当

新取一只冻存细胞,并储存在液氮中。将细胞储存在液氮中,直至复苏。

自行制备的冻存细胞无活性

将细胞按照生产商推荐的密度冻存。

制备冻存细胞时使用传代次数少的细胞。

严格按照生产商推荐的操作程序冻存细胞。请注意本手册推荐的冷冻程序是冻存细胞的一般流程,只能作为指导原则使用。

新取一只冻存细胞。

细胞复苏方法不当

严格按照生产商推荐的操作程序复苏细胞。请注意本手册推荐的解冻程序是复苏细胞的一般流程,只能作为指导原则使用。

确保冷冻细胞解冻迅速,接种前用预热的生长培养基缓慢稀释细胞。

复苏培养基使用不当

使用生产商推荐的培养基。确保培养基使用前已经预热。

细胞稀释过度

按照生产商的建议,将解冻后的细胞高密度接种,以改善复苏效果。

处理细胞时动作不够轻柔

冻存和复苏过程对大多数细胞都会造成不利影 响。不要通过涡旋振荡或者用力敲打培养瓶的方法使细胞脱落(培养昆虫细胞时除外),也不要高速离心细胞。

冻存液中所用保护剂在储存过程中未避光

如果未避光储存,冻存保护剂会转变为对细胞有毒性的物质;新取一只冻存保护剂,重新冻存细胞。

 

 ★由于细胞库现有细胞类目多,为了不出现混乱错误,需要了解相关细胞价格及详细资料直接call,对您造成的不便还请见谅!
 ★注:如运输过程中导致细胞污染或者死亡,我们将无条件补发
       收货后十个工作日内有其他问题提供照片可半价重发
最后,通过低温保藏储备一些细胞,以防支原体大面积来袭。如果支原体有抬头的迹象,或常规检测呈阳性结果,那么较可靠的补救措施是扔掉所有培养物,清洁培养箱和超净台,一切从头开始。当然,你得确保储备的细胞是不含支原体的。

 

 

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