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IPEC-J2 猪小肠上皮细胞 |IPEC-J2 动物细胞
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详细信息
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IPEC-J2 猪小肠上皮细胞 |IPEC-J2 动物细胞
【详细说明】
传代时PBS洗是很重要的一步，zui近发现，用PBS就可以把细胞消化开来。加入PBS放置10-15分钟，有些需要更长的时间，等到HSC-39人胃癌细胞系一个个分离开来的时候，就可以直接吹打下来，但是和胰酶消化一样，要控制好时间，不能时间太过了，要不然损伤HSC-39人胃癌细胞系，不容易成活，状态容易不好。这个方法对于某些细胞是很管用的。有些用胰酶消化不容易消化成单个的时候，或者临时没有胰酶了，可以选用此方法。不过一定要试试，看是否适合你的细胞。 传代 ，复苏，冻存， 1. 从液氮容器中取出冻存管，直接浸入37℃温水中，并不时摇动令其尽快融化。 2. 从37℃水浴中取出冻存管，打开盖子，用吸管吸出细胞悬液，加到离心管并滴加10倍以上培养液，混匀。 3. 离心， 1 000 rpm，5 min。 4. 弃去上清液，加入含10%小牛血清培养液重悬细胞，计数，调整细胞密度，接种培养瓶，37℃培养箱静置培养。 5. 次日更换一次培养液，继续培养。 冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以zui大限度的保存细胞活力。目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂，这两种物质能提高膜对水的通透性，加上缓慢冷冻可使内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。复苏细胞应采用快速融化的方法，这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化，避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。xy-0967R Caspase-12半胱胺酸蛋白酶蛋白-12抗体 |
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IPEC-J2 猪小肠上皮细胞 |IPEC-J2 动物细胞
做细胞实验的同学看过来。原装ATCC细胞现货来啦。
选择上海青旗生物细胞有3个理由：
1、细胞状态好，形态佳，易成活，是市面上比较好养的细胞之一;
2、物流迅速，复苏好后发货，次日就能到;
3、使用我司推荐的进口品牌血清进行培养实验，效果更佳。
专业技术人员李工收藏的细胞培养小技巧:
1. 买细胞要去靠谱的地方买，比如 ATCC 或者青旗生物。一般上面会有针对细胞的介绍，这样培养之前可以了解细胞正常生长的状态图、传代、培养基的类型等。
2. 不管是买的细胞，还是别人惠赠的细胞，刚拿到手赶紧的做两件事：检测是否有支原体污染;迅速扩增冻存，冻存细胞复苏后第二天*更换一次培养基。
3. 发现细胞有污染迅速处理掉，特别是当你养了很多种细胞时。细菌污染、真菌污染很容易发现，支原体污染的话，细胞会长的慢，可以买个支原体检测的试剂盒定期检测一下。
4. 不同细胞生长周期不同。有的生长很快，比如说 MDA-MB-231，传代的时候取离心悬液的十分之一就已经足够了。有的又是特别慢，比如 BT474，传代是一分二，复苏起始的时候两周多才能长满。这就需要要在培养细胞的过程中多多摸索。
5. 对于娇弱的细胞，就得细心呵护。胰酶消化不能过久，吹得时候要轻柔，离心时候也要注意转速和时间。每天都要去看一下细胞，肉眼观察培养基状况、显微镜下观察细胞生长状况。记住，是每天。
细胞培养常见问题及解决方法
问题 | 原因 | 解决方案 |
细胞生长缓慢 | 生长培养基使用不当 | 按照生产商的建议，使用相应的预热生长培养基。 |
生长培养基中血清质量差 | 使用其他批次血清。 | |
传代操作不当 | 按照生产商的建议消化时间及传代比例进行操作。 | |
换液过于频繁 | 降低换液频率，参考生产商推荐的换液频率。 | |
细胞传代次数过多 | 使用传代次数较少的健康细胞。 | |
细胞生长超过汇合状态 | 哺乳动物细胞传代应在细胞处于对数期、未达到汇合状态时进行，建议细胞密度达 80-90%传代。 | |
细胞被支原体污染 | 将细胞、培养基和试剂丢弃；新取一只冻存细胞，并且使用新的培养基和试剂。 | |
细胞复苏存活率低 | 细胞冻存不当 | 新取一只冻存细胞，并储存在液氮中。将细胞储存在液氮中，直至复苏。 |
自行制备的冻存细胞无活性 | 将细胞按照生产商推荐的密度冻存。 | |
制备冻存细胞时使用传代次数少的细胞。 | ||
严格按照生产商推荐的操作程序冻存细胞。请注意本手册推荐的冷冻程序是冻存细胞的一般流程，只能作为指导原则使用。 | ||
新取一只冻存细胞。 | ||
细胞复苏方法不当 | 严格按照生产商推荐的操作程序复苏细胞。请注意本手册推荐的解冻程序是复苏细胞的一般流程，只能作为指导原则使用。 | |
确保冷冻细胞解冻迅速，接种前用预热的生长培养基缓慢稀释细胞。 | ||
复苏培养基使用不当 | 使用生产商推荐的培养基。确保培养基使用前已经预热。 | |
细胞稀释过度 | 按照生产商的建议，将解冻后的细胞高密度接种，以改善复苏效果。 | |
处理细胞时动作不够轻柔 | 冻存和复苏过程对大多数细胞都会造成不利影 响。不要通过涡旋振荡或者用力敲打培养瓶的方法使细胞脱落(培养昆虫细胞时除外)，也不要高速离心细胞。 | |
冻存液中所用保护剂在储存过程中未避光 | 如果未避光储存，冻存保护剂会转变为对细胞有毒性的物质；新取一只冻存保护剂，重新冻存细胞。 |
★由于细胞库现有细胞类目多，为了不出现混乱错误，需要了解相关细胞价格及详细资料直接call，对您造成的不便还请见谅！
★注：如运输过程中导致细胞污染或者死亡，我们将无条件补发
收货后十个工作日内有其他问题提供照片可半价重发
最后，通过低温保藏储备一些细胞，以防支原体大面积来袭。如果支原体有抬头的迹象，或常规检测呈阳性结果，那么较可靠的补救措施是扔掉所有培养物，清洁培养箱和超净台，一切从头开始。当然，你得确保储备的细胞是不含支原体的。
