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细胞名称：MAC-T牛乳腺上皮细胞|MAC-T正常动物细胞株

MAC-T牛乳腺上皮细胞特性：

1） 来源：MDCK犬正常肾细胞

2） 含量：>1x106 个/mL

3） 污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

4） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

5）培养基：90%RPMI-1640+10%FBS

6）生长特性：贴壁生长

运输和保存：使用含有优质胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞。收到细胞后，可在1000RPM，常温条件下，离心5min后，于洁净操作台弃去上清，加入推荐使用的培养基后转移至10cm培养皿或者T25培养瓶中培养，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途：仅供科研使用。               

MAC-T牛乳腺上皮细胞培养步骤

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备基础培养基( GIBCO，，添加NaHCO3 1.5g/L，)；优质胎牛血清，10%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）MDCK犬正常肾细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。

MAC-T牛乳腺上皮细胞|MAC-T正常动物细胞株注意事项：

1.收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。

2.先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置数小时（4h左右），稳定细胞状态，切忌在温箱内静置过夜。

3.静置后镜检，拍照，记录细胞状态。建议传代后也拍照记录细胞生长情况。

4.  悬浮细胞：将细胞瓶内液体都转移至无菌离心管内，1000 转/分钟离心5min，培养基上清可备用，管底细胞沉淀用培养基重悬。镜检时若细胞密度超过80%，可将细胞悬液分至2个细胞瓶内培养；若密度未超过80%，细胞悬液移至原瓶继续培养，待达到80%时再正常传代。备注：聚团生长慢，有密度依赖，必须使用T25培养瓶竖立培养，3天一次半量换液一次，1-2周传代一次。

贴壁细胞：若细胞密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，收集细胞瓶内的培养基，留8ml继续培养至80%左右再传代，瓶盖可稍微拧松。备注：细胞贴壁慢，传代后细胞放2天不动。

5.细胞瓶内的培养基含血清和双抗，可收集后4℃保存备用，可补加2%血清。刚开始传代时建议一半用细胞瓶内的培养基，一半用客户自备的培养基，使细胞逐渐适应培养条件，以免因不适应而造成生长状态不佳。

6.因为MAC-T牛乳腺上皮细胞培养过程外因太多，所以我们的售后保障期为一周，超过一周的细胞我们会酌情处理，但不提供免费更换服务。ZYC3516    人肺动脉外膜成纤维细胞    HPAF    形态：贴壁，悬浮均有；上皮细胞样    培养条件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3517    人肺泡上皮细胞    HPAEpiC    形态：贴壁，悬浮均有；上皮细胞样    培养条件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3518    人支气管上皮细胞    HBEpiC    形态：贴壁，悬浮均有；上皮细胞样    培养条件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3519    人气管上皮细胞    HTEpiC    形态：贴壁，悬浮均有；上皮细胞样    培养条件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3520    人小气道上皮细胞    HSAEpiC    形态：贴壁，悬浮均有；上皮细胞样    培养条件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3521    人肺成纤维细胞    HPF    形态：贴壁，悬浮均有；上皮细胞样    培养条件：MEM/F12 +10% FBS 

做细胞实验的同学看过来。原装ATCC细胞现货来啦。 

选择上海青旗生物细胞有3个理由：

1、细胞状态好，形态佳，易成活，是市面上比较好养的细胞之一;

2、物流迅速，复苏好后发货，次日就能到;

3、使用我司推荐的进口品牌血清进行培养实验，效果更佳。

专业技术人员李工收藏的细胞培养小技巧:

1. 买细胞要去靠谱的地方买，比如 ATCC 或者青旗生物。一般上面会有针对细胞的介绍，这样培养之前可以了解细胞正常生长的状态图、传代、培养基的类型等。

2. 不管是买的细胞，还是别人惠赠的细胞，刚拿到手赶紧的做两件事：检测是否有支原体污染;迅速扩增冻存，冻存细胞复苏后第二天*更换一次培养基。

3. 发现细胞有污染迅速处理掉，特别是当你养了很多种细胞时。细菌污染、真菌污染很容易发现，支原体污染的话，细胞会长的慢，可以买个支原体检测的试剂盒定期检测一下。

4. 不同细胞生长周期不同。有的生长很快，比如说 MDA-MB-231，传代的时候取离心悬液的十分之一就已经足够了。有的又是特别慢，比如 BT474，传代是一分二，复苏起始的时候两周多才能长满。这就需要要在培养细胞的过程中多多摸索。

5. 对于娇弱的细胞，就得细心呵护。胰酶消化不能过久，吹得时候要轻柔，离心时候也要注意转速和时间。每天都要去看一下细胞，肉眼观察培养基状况、显微镜下观察细胞生长状况。记住，是每天。

细胞培养常见问题及解决方法

 ★由于细胞库现有细胞类目多，为了不出现混乱错误，需要了解相关细胞价格及详细资料直接call，对您造成的不便还请见谅！
 ★注：如运输过程中导致细胞污染或者死亡，我们将无条件补发
       收货后十个工作日内有其他问题提供照片可半价重发
最后，通过低温保藏储备一些细胞，以防支原体大面积来袭。如果支原体有抬头的迹象，或常规检测呈阳性结果，那么较可靠的补救措施是扔掉所有培养物，清洁培养箱和超净台，一切从头开始。当然，你得确保储备的细胞是不含支原体的。