传代时PBS洗是很重要的一步，zui近发现，用PBS就可以把细胞消化开来。加入PBS放置10-15分钟，有些需要更长的时间，等到HSC-39人胃癌细胞系一个个分离开来的时候，就可以直接吹打下来，但是和胰酶消化一样，要控制好时间，不能时间太过了，要不然损伤HSC-39人胃癌细胞系，不容易成活，状态容易不好。这个方法对于某些细胞是很管用的。有些用胰酶消化不容易消化成单个的时候，或者临时没有胰酶了，可以选用此方法。不过一定要试试，看是否适合你的细胞。

                传代 ，复苏，冻存，

 1.  从液氮容器中取出冻存管，直接浸入37℃温水中，并不时摇动令其尽快融化。

 2.  从37℃水浴中取出冻存管，打开盖子，用吸管吸出细胞悬液，加到离心管并滴加10倍以上培养液，混匀。

 3.  离心， 1 000 rpm，5 min。

 4.  弃去上清液，加入含10%小牛血清培养液重悬细胞，计数，调整细胞密度，接种培养瓶，37℃培养箱静置培养。

 5.  次日更换一次培养液，继续培养。

冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以zui大限度的保存细胞活力。目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂，这两种物质能提高膜对水的通透性，加上缓慢冷冻可使内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。复苏细胞应采用快速融化的方法，这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化，避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。xy-0967R    Caspase-12半胱胺酸蛋白酶蛋白-12抗体
xy-1431R    CK17细胞角蛋白17抗体
xy-0979R    CD38CD38抗体
xy-0980R    CD38CD38抗体
xy-1592R    CA I碳酸酐酶1抗体
xy-1709R    CA II碳酸酐酶2抗体
xy-1593R    CK II Alpha丝/苏氨酸蛋白质激酶抗体
xy-1594R    CTNNA1α-连环蛋白抗体（钙粘蛋白相关蛋白）Catenin α

问题

原因

解决方案

细胞生长缓慢

生长培养基使用不当

按照生产商的建议，使用相应的预热生长培养基。

生长培养基中血清质量差

使用其他批次血清。

传代操作不当

按照生产商的建议消化时间及传代比例进行操作。

换液过于频繁

降低换液频率，参考生产商推荐的换液频率。

细胞传代次数过多

使用传代次数较少的健康细胞。

细胞生长超过汇合状态

哺乳动物细胞传代应在细胞处于对数期、未达到汇合状态时进行，建议细胞密度达 80-90%传代。

细胞被支原体污染

将细胞、培养基和试剂丢弃；新取一只冻存细胞，并且使用新的培养基和试剂。

细胞复苏存活率低

细胞冻存不当

新取一只冻存细胞，并储存在液氮中。将细胞储存在液氮中，直至复苏。

自行制备的冻存细胞无活性

将细胞按照生产商推荐的密度冻存。

制备冻存细胞时使用传代次数少的细胞。

严格按照生产商推荐的操作程序冻存细胞。请注意本手册推荐的冷冻程序是冻存细胞的一般流程，只能作为指导原则使用。

新取一只冻存细胞。

细胞复苏方法不当

严格按照生产商推荐的操作程序复苏细胞。请注意本手册推荐的解冻程序是复苏细胞的一般流程，只能作为指导原则使用。

确保冷冻细胞解冻迅速，接种前用预热的生长培养基缓慢稀释细胞。

复苏培养基使用不当

使用生产商推荐的培养基。确保培养基使用前已经预热。

细胞稀释过度

按照生产商的建议，将解冻后的细胞高密度接种，以改善复苏效果。

处理细胞时动作不够轻柔

冻存和复苏过程对大多数细胞都会造成不利影 响。不要通过涡旋振荡或者用力敲打培养瓶的方法使细胞脱落(培养昆虫细胞时除外)，也不要高速离心细胞。

冻存液中所用保护剂在储存过程中未避光

如果未避光储存，冻存保护剂会转变为对细胞有毒性的物质；新取一只冻存保护剂，重新冻存细胞。