液相色谱仪验证

1．液相色谱仪介绍

液相色谱仪是利用混合物在液-固或不互溶的两种液体之间分配比的差异，对混合物进行先分离，然后分析鉴定物质成分及含量的仪器。高效液相色谱法只要求样品能制成溶液，不受样品挥发性的限制，流动相可选择的范围宽，固定相的种类繁多，因而可以分离热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。与试样预处理技术相配合，HPLC所达到的高分辨率和高灵敏度，使分离和同时测定性质上十分相近的物质成为可能，能够分离复杂相体中的微量成分。由于HPLC具有高分辨率、 高观灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用，流出组分易先收集等优点，因而被广泛应用的生物化学，食品分析，医药研究，环境分析，无机分析等各种领域。

2．液相色谱仪的原理

液相色谱仪由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相）内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。

3．为什么液相色谱仪要做验证呢？

这是为了保证液相色谱仪分析检测结果准确、可靠，所以必须对所用到的组成系统各部分进行验证，以证明该系统符合检测的目的和要求，这就是仪器验证。从本质上讲，仪器验证就是根据检测物质的要求，预先对仪器设置一定的参数范围及合适的检测器，并通过设计合理的试验来验证该仪器是否符合检测项目的要求。仪器验证是保证整个试验是否能成功的先决条件，只有经过验证的仪器，确保该仪器各部分都在良好的情况下才能用于物质成分的分析检测，这样使检测结果更准确，尽可能减小误差。

4．液相色谱仪的验证项目

（1）安装确认

a. 文件确认

b. 附件确认

c. 安装环境确认

d. 安装情况确认

（2）运行功能确认

a. 运行功能确认

b. 软件控制功能测试

c. 流速设定误差测试

d. 流速重复性测试

e. 柱温设定误差测试

f. 柱温稳定性测试

（3）性能确认

a. 基线噪声测试

b. 基线漂移测试

c. 检测限测试

d. 重复性测试

5．液相色谱仪使用的注意事项如下

（1）流动相均需色谱纯度，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质（使用0.45μm或更细的膜过滤）。

（2）流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用，脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。

（3）不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。

（4）长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相(如，甲醇等)，因为，纯水易长霉。

（5）更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边靖洗，然后插入新的流动相中。更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。

公司背景介绍：

华谱&泽恒是专注于为生物制药行业提供实验室仪器计量校准、GMP验证服务/3Q验证/设备确认/厂房验证的专业服务商。我们给制药客户解决的是一站式QC/QA/工程/验证等事业部的质控外包服务。

我们活跃于许多关键市场领域，从细胞/基因治疗领域、抗体药方向、干细胞治疗到疫苗生产等生物制药领域，一直以来都是围绕生物医药客户实现让“让制药体系更安全"为使命，提高服务的效率、降低行业的成本、践行好的客户服务体验。自主品牌：华谱（上海）检测技术有限公司、泽恒计量检测（北京）有限公司。