16815ES Hieff® Fast Cell Direct RT set (for probe)
该企业相似产品
企业简介
翌圣生物科技（上海）股份有限公司【Yeasen Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd.】是一家以蛋白质改造和酶进化技术为驱动，聚焦生命科学产业链上游核心原料，从事分子、蛋白和细胞三大品类生物试剂的研发、生产与销售的高新技术企业，通过打通分子酶、蛋白、抗体、核酸、细胞的技术开发路径，成为国内少数同时覆盖三大品类生物试剂、兼备核心技术自主研发能力和规模化生产能力的高新技术企业，产品广泛应用于生命科学研究领域、诊断与检测领域和生物医药领域。
主营业务
公司凭借在蛋白质改造和酶进化领域的技术优势和深耕生物试剂行业多年积累的丰富经验，构建了品质优良、类型齐全、种类丰富的产品管线。自公司成立以来，公司研发、生产和销售的生物试剂超过3000种，涵盖分子、蛋白、细胞三大品类的生物试剂，能够满足客户多种类型生物试剂的一体化采购需求。公司核心产品覆盖qPCR系列、NGS系列、逆转录系列、核酸提取与纯化系列、PCR系列、分子克隆系列、体外转录系列、抗体、蛋白纯化系列、蛋白分析系列、重组蛋白、细胞分析系列、细胞培养系列、细胞转染系列、报告基因检测系列等多个品类的生物试剂，广泛应用于生命科学研究、诊断检测和生物医药等领域。
发展历程
荣誉资质
翌圣生物通过申请商标和软件著作权的方式保障核心技术和市场竞争力，不断加强公司品牌建设。截至2022年3月31日，公司已经获得授权18项（其中发明14项、实用新型1项、外观设计3项）和45项与生物试剂相关的软件著作权，拥有经国家知识产权局商标局核准的注册商标权37项以及4项境外注册商标，是国家高新技术企业和上海市专精特新企业。
创新平台
经过多年的产品研发技术经验的沉淀以及持续的研发创新，翌圣生物积极开展“产学研”合作，与拥有生物催化与酶领域国家重点实验室的湖北大学、拥有教育部工业生物领域重点研究基地的江南大学展开合作，优化生物试剂关键原料的生产和表达工艺。翌圣生物以基因工程技术、生物信息技术、细胞生物学技术、免疫学技术、生化分析技术等生命科学领域的共性生物技术为基础，建立了六大核心技术平台——双向分子酶理性设计与定向进化平台、密度发酵与超洁净纯化平台、分子诊断试剂关键原料研发平台、高通量测序建库试剂创新研发平台、高性能单克隆抗体研发平台和mRNA医药应用研发平台，目前已经自主研发出20项核心技术，打通分子酶、蛋白、抗体、核酸、细胞的技术开发路径，覆盖技术研发、产品升级、规模生产和质量控制等生物试剂研发和生产的各关键环节。
工业化生产
翌圣生物拥有按照准GMP 标准建设运营的工业化生产基地，配有吨级发酵线、工业级 AKTA 纯化线和全自动包装线。同时，公司通过了ISO 13485:2016质量管理体系认证，从原料控制、生产管理、质检管控、仓储运输等对生产线进行360度管理监督，保证产品过程的可控制性及可追溯性，竭尽全力为您提供可靠的产品。
客户服务
翌圣生物凭借优质稳定的产品质量、高效及时的响应能力、快速稳定的交付能力和周到完备的售后服务获得了众多科研用户和工业用户的认可，为检测公司、治疗公司、工具类公司和科学研究实验室提供应用于科学研究、体外诊断、基因测序、生物医药等的生物试剂。与中国科学院、清华大学、北京大学、复旦大学、上海交通大学、浙江大学等顶尖科研院所和华大基因、恒瑞医药、药明康德、之江生物、圣湘生物、斯微生物、金斯瑞、思路迪等工业客户建立了稳定、紧密的合作关系，公司产品被多次使用在Nature、Science、Cell等国际顶级期刊论文发表中。
公司企业文化
帮助客户创造价值，让世界更健康更快乐
◎ 成为生命科学工具领域全球Top⑩
◎ 具备驱动产业变革的技术创新能力
◎ 拥有一支持续学习型的翌圣铁军
翌圣生物始终秉承“帮助客户创造价值，让世界更健康更快乐”的使命，专注于技术创新和产品升级，不断拓展核心技术的应用领域，为客户提供更为的产品与服务，助力我国打造自主可控的生物试剂产业链。同时，翌圣生物将进一步推进国际化战略，继续布局和拓展海外市场，为全球生物试剂产业发展贡献力量。
详细信息
Hieff® Fast Cell Direct Probe RT-qPCR Kit 适用于对各种动物细胞进行基因定量表达分析（如cell line 化的贴壁细胞和悬浮细胞、原代培养细胞、各种干细胞、iPS 细胞等），无需提RNA，可直接进行qPCR表达分析，用时短，操作简单，出错率低，最短只需1.5 h就可高效完成从模板制备到反转录反应及基因表达分析等步骤。该产品为探针法细胞直扩RT-qPCR试剂盒的反转录模块，为补充试剂。
组分信息
组分编号 | 组分名称 | 16815ES40 | 16815ES60 |
16815-A | 4× Hifair® FCD RT Mix | 200 μL | 500 μL |
16815-B | RNase Free H2O | 2 mL | 5 mL |
储存条件
长期保存时请于-25~-15℃保存，有效期1年。
使用说明
一、裂解产物的制备
将试剂放置室温下融化，使用前上下颠倒，轻轻混匀，并轻微离心后使用，避免起泡。没有混匀试剂、使用振荡器混匀、未在冰上配置试剂等会导致反应性能下降。
将细胞转移至离心管中*，5000 rpm离心2 min收集细胞**，充分吸除培养基。若细胞在96孔板中培养，可直接吸除培养基。
各个孔内加入FCD Washing Buffer 150 μL，吸打清洗细胞，5000 rpm离心2 min，吸尽FCD Washing Buffer。
各孔中加入48 μL FCD Lysis Buffer溶液，2 μL DNase I溶液，室温吸打混匀后静置5 min，孵育后加入2.5 μL FCD Stop Solution***, 吸打混匀5次左右，即可得到裂解产物****，细胞数量超过1× 105 cells时可能会有裂解残留物属正常现象。
*50 μL裂解体系适配细胞数的基本要求是每孔1× 102 - 1× 105 cells，若细胞数量较多，可适当等比例增加FCD Lysis Buffer溶液和DNase Ⅰ溶液的用量。
**不同细胞的离心条件不同，请使用适合于所用细胞的离心速度进行离心。
***50 μL的裂解液需加入2.5 μL的FCD Stop Solution。依实验需要，加入裂解液量增大时需相应增大FCD Stop Solution的量。
****细胞裂解产物溶液长期保存时，请置于-25~-15℃。
二、反转录
室温融化4× Hifair® FCD RT Mix后轻微颠倒混匀，置于冰上并按下表配置反应体系：
组分 | 体积 （μL） | 终浓度 |
4× Hifair® FCD RT Mix | 5 | 1× |
裂解产物* | x | - |
RNase-free H2O | Up to 20 | - |
表1 反转录反应体系
*避免吸入细胞碎片，推荐使用量为2 μl，最大不超过反应体系的55%。
移液器轻轻混匀上述配制的反应液，按下表程序进行反转录反应**：
反应温度 | 反应时间 |
37℃ | 5 min |
85℃ | 5 sec |
表2 反转录反应程序
**反转录温度推荐使用37℃，反转录产物可直接进行下游qRT-PCR检测。为避免反转录体系对qPCR反应的抑制，得到合适的Ct值（10-35），可将产物稀释10-1000倍后使用。若短时间内不进行下游实验，可放置于-25~-15℃保存。
三、荧光定量PCR
体系配置
使用下列组份比例配制反应液（配制过程请于冰上进行）：
组分 | 体积（μL） | 终浓度 |
2× Hieff® FCD Probe qPCR Mix | 12.5 | 1× |
Forward Primer (10 μM) | 0.5 | 200 nM |
Reverse Primer (10 μM) | 0.5 | 200 nM |
Probe (10 μM) | 0.25-1 | 100-400 nM |
反转录产物* | x | - |
RNase-free H2O | Up to 25 | - |
表3 qPCR反应体系
*高浓度模板易导致非特异扩增，可适当将模板稀释5-50倍。模板推荐用量4 μL。反应性能较差时，可以在0.2-1.0 μM范围内调整引物探针浓度。
荧光定量PCR快速扩增程序（推荐）
本产品推荐使用快速程序扩增，可大大减少反应时间。使用Tm值较低的引物难以扩增时，可额外调整退火温度。
循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 95℃ | 10 sec | 1 |
变性 | 95℃ |
| 45 |
退火/延伸** | 60℃ | 10 sec |
表4 qPCR反应程序（快速）
**退火/延伸温度、终延伸时间可根据实验要求适当调整。 快速程序适用于绝大多数基因，个别复杂二级结构基因可尝试常规程序。
荧光定量PCR常规扩增程序
实验仪器不满足快速反应时间时，也可使用常规程序进行扩增。
循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 95℃ | 10 sec | 1 |
变性 | 95℃ |
| 40-45 |
退火/延伸** | 60℃ | 30 sec |
表5 qPCR反应程序（常规）
注意事项
使用前，将冻存的各组分充分融解并轻轻混匀后使用。
实验时，请尽量使用无污染的耗材，避免污染。
本产品避免反复冻融，配制时应避免强光照射。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
本产品仅作科研用途！
