肌酸激酶（CK）活性检测试剂盒说明书
紫外分光光度法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC1140
规格：50T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂一：临用前加10 mL蒸馏水溶解；用不完的分装后-20℃保存，禁止反复冻融；

2. 试剂二：临用前加入0.5 mL蒸馏水溶解；用不完的分装后-20℃保存，禁止反复冻融；

3. 试剂三：临用前取1支加入0.5 mL蒸馏水溶解；用不完的分装后-20℃保存，禁止反复冻融；

4. 试剂四：临用前加入0.65 mL蒸馏水溶解；用不完的分装后-20℃保存，禁止反复冻融；

5. 工作液：临用前根据用量将试剂一、试剂二、试剂三、试剂四、试剂五以70:4:7:10:90的比例混合（体积比）。现用现配。使用前室温孵育20min（该步骤不可省略）。

产品说明：
肌酸激酶（Creatine Kinase，CK） (EC 2.7.3.2)也成为肌酸磷酸激酶，主要存在于心脏、肌肉以及脑等组织中，能可逆地催化肌酸与ATP之间的转磷酰基反应，是一个与细胞能量运转、肌肉收缩、ATP再生有直接关系的重要激酶。
CK催化磷酸肌酸和ADP生成肌酸和ATP，己糖激酶催化ATP与葡萄糖形成6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脱氢酶催化6-磷酸葡萄糖与NADP⁺生成NADPH，导致340nm光吸收值增加，以此来表示CK酶活。




注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
天平、低温离心机、恒温水浴锅、紫外分光光度计、1mL石英比色皿、恒温水浴锅、研钵/匀浆器、蒸馏水。

操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料”附件

注意事项：

1. 血清的CK不稳定，采集样本后尽快测定，4℃避光保存可稳定24h。

2. 样本蛋白质含量需要另外测定。

3. OD 值大于0.6可用提取液适当稀释样本，并在计算公式中相应的改变稀释倍数。

4. ΔA空白管一般不超过0.01。

实验实例：

1. 取0.1g小鼠脑加入1mL提取液进行匀浆研磨，取上清后再用提取液稀释4倍，之后按照测定步骤操作，用1mL石英比色皿测得计算ΔA测定管=A2测定-A1测定=0.638-0.149=0.489，ΔA空白管=A2空白-A1空白=0，ΔA=ΔA测定管-ΔA空白管=0.489-0=0.489，按组织样本质量计算酶活得：CK活性（U/g 质量）=268×ΔA÷W×4（稀释倍数）=268×0.489÷0.1×4（稀释倍数）=5242.08 U/g 质量。

2. 取鸭血清200μL，按照测定步骤操作，测得计算ΔA测定管=A2测定-A1测定=0.445-0.423=0.022，ΔA空白管=A2空白-A1空白=0，ΔA=ΔA测定管-ΔA空白管=0.022-0=0.022，按血清体积计算酶活得：CK活性（U/mL）=268×ΔA=268×0.022=5.896 U/mL。

相关发表文献：

1. Defang Li, Ning Lu, Jichun Han,et al. Eriodictyol Attenuates Myocardial Ischemia-Reperfusion Injury through the Activation of JAK2. Frontiers in Immunology. January 2018;(IF3.845)

2. Xu Y, Meng X, Hou X, et al. A mutant of the Buthus martensii Karsch antitumor-analgesic peptide exhibits reduced inhibition to hNav1. 4 and hNav1. 5 channels while retaining analgesic activity[J].Journal of Biological Chemistry, 2017,  292(44): 18270-18280

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