半纤维素含量检测试剂盒说明书

可见分光光度法

货号: BC4440

规格: 50T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1、 试剂一：80%乙醇自备；

2、 标准品：10 mg D-木糖。临用前加入1 mL蒸馏水溶解配制成10 mg/mL的标准溶液。2-8℃保存4周。

产品说明：

半纤维素是指在植物细胞壁中与纤维素共生、可溶于碱溶液，遇酸后远较纤维素易于水解的那部分植物多糖，广泛存在于植物中，其分布因植物种属、成熟程度、早晚材、细胞类型及其形态学部位的不同而有很大差异。一种植物往往含有几种由两或三种糖基构成的半纤维素，其化学结构各不相同。半纤维素是一种新型的可利用能源。

半纤维素在一定条件下水解为还原性糖类，还原糖在碱性条件下与3，5-二硝基水杨酸（DNS）加热被氧化成糖酸及其它产物，DNS则被还原为棕红色3-氨基-5-硝基水杨酸，在540nm处具有特征吸收峰，通过吸光值的变化即可定量检测半纤维素的含量

技术指标：

低检出限：0.2311 mg/mL

线性范围：0.4-2.5 mg/mL

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

天平、可见分光光度计、台式离心机、恒温水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵、30~50目筛、蒸馏水、EP管。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

样本自然风干或用烘箱烘干至恒重，研钵充分研磨后，过30~50目筛。

二、测定步骤

1、 分光光度计预热30 min以上，调节波长至540 nm，蒸馏水调零。

2、 标准液的稀释：将10 mg/mL的标准溶液用蒸馏水稀释至2.5、2、1、0.8、0.6、0.4 mg/mL标准溶液待测。

3、 标准液稀释可参考下表：

备注：实验中每个标准管需125µL标准溶液。

4、 操作表（在1.5 mL EP管中操作）：

三、半纤维素含量计算

1、标准曲线的绘制：

根据标准管的浓度（y，mg/mL）和吸光度ΔA标准（x，ΔA标准），建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA测定（x，ΔA测定）带入公式计算样本浓度（y，mg/mL）。

2、半纤维素含量的计算：

半纤维素含量（mg/g 干重）= y×V样总÷W×F= y÷W×F

V样总：加入提取液体积，1 mL；W：样本质量，g；F：稀释倍数。

注意事项：

1、如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。

2、建议将加入提取液二离心后的上清液稀释10~20倍后检测。计算公式中注意乘以稀释倍数。

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