土壤碱性磷酸酶（S-AKP/ALP）活性检测试剂盒说明书

可见分光光度法

注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：BC0280

规格：50T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1．试剂二：临用前加50 mL蒸馏水充分溶解，2-8℃保存8周。

2．试剂四：临用前取1支加576 μL无水乙醇（自备），24 μL蒸馏水充分溶解。用不完的试剂2-8℃保存2周（变褐色后不能再使用）

3．标准品：0.5 μmol/mL苯*准液。

产品说明：

土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷化合物矿化的酶，其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH显著影响。通常按照其最适pH范围，分为碱性、中性和酸性三种类型磷酸酶。

碱性环境中，S-AKP/ALP催化磷酸苯二钠水解生成苯*和磷酸*二钠，通过测定酚的生成量即可计算出S-AKP/ALP活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、冰、研钵、蒸馏水、30-50目筛、乙醇和甲苯（不允许快递）。

操作步骤：

一、样本处理 （可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1. 新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30~50目筛。

2. 称取风干混匀土壤约0.1g，加入0.05mL甲苯（自备），轻摇15min；加0.4 mL试剂一并且摇匀后，置于37℃水浴锅/恒温培养箱，开始计时，催化反应24h；到时后迅速加入1mL试剂二充分混匀，以终止酶催化的反应。10000rpm室温离心10min，取上清液置于冰上待测。

二、测定步骤

1. 分光光度计预热30min以上，调节波长到660nm，蒸馏水调零。

2. 空白管：取1mL玻璃比色皿，加入50μL试剂一，100μL试剂三，20μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830μL，混匀后室温静置30min，于660nm测定吸光度，记为A空白管。（空白管只需要测定1-2次）

3. 标准管：取1mL玻璃比色皿，加入50μL标准液，100μL试剂三，20μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830μL，混匀后室温静置30min，于660nm测定吸光度，记为A标准管。（标准管只需要测定1-2次）

4. 测定管：取1mL玻璃比色皿，加入50μL上清液，100μL试剂三，20μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830μL，混匀后室温静置30min，于660nm测定吸光度，记为A测定管。

三、S-ALP/ALP活性计算

活性单位定义：37℃中每克土壤每天释放1nmol酚为1个酶活单位。

S-AKP/ALP活性（U/g 土样）=[C标准液×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)]×V总÷W÷T×1000

= 725×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)÷W

C标准液：0.5μmol/mL；V总：催化体系总体积，1.45mL；W：土壤样本质量，g；T：催化反应时间，24 h=1d；1000：单位换算系数，1μmol=1000nmol。

相关发表文献：

[1] Liu B, Wang S, Wang J, et al. The great potential for phytoremediation of abandoned tailings pond using ectomycorrhizal Pinus sylvestris[J]. Science of The Total Environment, 2020, 719: 137475.

[2] Shao T, Zhao J J, Liu A, et al. Effects of soil physicochemical properties on microbial communities in different ecological niches in coastal area[J]. Applied Soil Ecology, 2020: 103486.

参考文献：

[1] Guan S. Soil Enzyme and Its Research Method [M]. Beijing: Science Press, 1982.

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