货号：YC1205                                                   规格：100管/96样

总抗氧化能力（Total antioxidant capacity，T-AOC）试剂盒说明书

微量法

注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

研究意义：

测定对象中各种抗氧化物质和抗氧化酶等构成总抗氧化水平。在生物学、医学和药学研究中常常检测血浆、血清、唾液、尿液等各种体液，细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液及各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力。

测定原理：

在酸性环境下，还原 Fe³⁺-三吡啶三吖嗪(Fe³⁺-TPTZ)产生蓝色的 Fe²⁺-TPTZ 的能力反映了总抗氧化能力。

自备实验用品：

恒温水浴锅、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。

试剂组成和配制：

提取液：液体 100mL×1 瓶，使用前预冷。

试剂一：液体 15mL×1 瓶，避光保存。

试剂二：液体 1.5mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂三：液体 1.5mL×1 瓶，避光保存。

混合液(现配现用)：将试剂一、试剂二、试剂三按10:1:1的比例混合，使用前37℃预温。

样品的制备：

(1) 血清、血浆、唾液或尿液等液体样品

血浆（制备时可以使用肝素或柠檬酸钠抗凝，不宜使用EDTA抗凝）4℃，5000rpm 离心10min，取上清待测。血清、唾液或尿液样品直接用于测定，也可以-80℃冻存（不宜超30d）后再测定。

(2) 组织样品

按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

(3) 细胞样品

按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎（功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；10000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

操作步骤：

1、分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至593nm，蒸馏水调零。

2、操作表

注意：空白管只需测定一次。

总抗氧化能力计算公式：

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线：y=0.6308x+0.1291，R²=0.9989

（1）按样本质量计算

总抗氧化能力（U/g）=（△A-0.1291）÷ 0.6308×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)

=53.9×（△A-0.1291）÷W

（2）按样本蛋白浓度计算

总抗氧化能力（U/mg prot）=（△A-0.1291）÷0.6308×V 反总÷(V 样×Cpr)

=53.9×（△A-0.1291）÷Cpr

（3）按细胞计算

总抗氧化能力（U/10⁴cell）=（△A-0.1291）÷0.6308×V反总÷V样×V样总÷细胞数量（万个）= 53.9×（△A-0.1291）÷ 细胞数量（万个）

（4）按液体体积计算

总抗氧化能力（U/mL）=（△A-0.1291）÷0.6308×V 反总÷V 样= 53.9×（△A-0.1291）

V 样总：加入提取液体积，1 mL； V 反总：反应总体积，204μL；V 样：反应中样品体积，

6μL；W：样品质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL

b.用 96 孔板测定的计算公式如下

标准曲线：y=0.3154x+0.1291；R²=0.9989

（1）按样本质量计算

总抗氧化能力（U/g）=（△A-0.1291）÷0.3154×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)

=107.8×（△A-0.1291）÷W

（2）按样本蛋白浓度计算

总抗氧化能力（U/mg prot）=（△A-0.1291）÷0.3154×V 反总÷(V 样×Cpr)

=107.8×（△A-0.1291）÷Cpr

(3) 按细胞计算

总抗氧化能力（U/10⁴cell）=（△A-0.1291）÷0.3154×V反总÷V样×V样总÷细胞数量（万个）= 107.8×（△A-0.1291）÷ 细胞数量（万个）

（4）按液体体积计算

总抗氧化能力（U/mL）=（△A-0.1291）÷0.3154×V 反总÷V 样= 107.8×（△A-0.1291）

V 样总：加入提取液体积，1 mL； V 反总：反应总体积，204μL；V 样：反应中样品体积，

6μL；W：样品质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL

注意事项：

1. 试剂二对人体有刺激性，请采取适当的防护措施。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴乳胶手套操作。

2. 尽量避免使用在酸性条件下呈蓝色或接近蓝色的试剂，否则对本试剂盒的检测结果产生干扰。

3. 样品中不宜添加 Tween、Triton 和 NP-40 等去垢剂和 DTT、巯基乙醇等影响氧化还原反应的还原剂。

4. 如果样品测定出来的吸光值在标准曲线范围以外，需把样品适当稀释或浓缩后再进行测定。

5. 试剂盒 2-8℃保存。

微量葡萄糖含量试剂盒说明书（测组织、细菌或细胞）

ca++ mg++- atp 酶活性测定说明书