货号：YC2306                                                 规格：50管/48样

总抗氧化能力（Total antioxidant capacity ，T-AOC）

试剂盒说明书

可见分光光度法

注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

测定对象中各种抗氧化物质和抗氧化酶等构成总抗氧化水平。在生物学、医学和药学研究中常常检测血浆、血清、唾液、尿液等各种体液，细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液

及各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力。

测定原理

在酸性环境下，物质还原Fe³⁺-三吡啶三吖嗪(Fe³⁺-TPTZ)产生蓝色的Fe²⁺-TPTZ的能力反映了其总抗氧化能力。

自备实验用品

可见分光光度计、恒温水浴锅、低温离心机、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配制

提取液：液体 60mL×1 瓶，使用前预冷。

试剂一：液体 50mL×1 瓶，避光保存。

试剂二：液体 5mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂三：液体 5mL×1 瓶，避光保存。

样品的制备

(1) 血清、血浆、唾液或尿液样品

血浆（制备时可以使用肝素或柠檬酸钠抗凝，不宜使用 EDTA 抗凝）4℃，5000rpm 离心10min，取上清待测。血清、唾液或尿液样品直接用于测定，也可以-80℃冻存（不宜超30 d）后再测定。

(2) 组织样品

按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

(3) 细胞样品

按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入1mL 提取液），冰浴超声波破碎（功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；10000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

操作步骤

混合液(现配现用)：将试剂一、试剂二、试剂三按 10:1:1 的比例混合，使用前预温至 37℃ 。

注意：空白管只需测定一次。

总抗氧化能力计算

1. 定义：样品的抗氧化能力以达到同样吸光度变化值（△A）所需的标准液离子浓度表示。

标准曲线为 y=0.6308 x +0.1291，R²=0.9989

2. 计算公式：

(1)按蛋白浓度计算

总抗氧化能力（U/mg prot）=1÷0.6308×（△ A-0.1291）× V 反总÷（V 样× Cpr）

=53.9×（△ A-0.1291）÷ Cpr

(2)按样品质量计算

总抗氧化能力（U/g）=1÷0.6308×（△ A-0.1291）× V 反总÷（V 样÷V 样总×W）

=53.9×（△ A-0.1291）÷ W

(3)按细胞数量计算

总抗氧化能力（U/10⁴ cell）=1÷0.6308×（△A-0.1291）×V 反总÷V 样×V 样总÷细胞数量（万个）= 53.9×（△A-0.1291）÷ 细胞数量（万个）

(4)按液体体积计算

总抗氧化能力（U/mL）=1÷0.6308×（△A-0.1291）× V 反总÷V 样

=53.9×（△A-0.1291）÷ Cpr

V 样总：加入提取液体积，1 mL； V 反总：反应总体积，1.02mL；V 样：反应中样品体积，

0.03mL；W：样品质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL

注意事项

1. 试剂二对人体有刺激性，请采取适当的防护措施。为了您的安全和健康，请穿实验服并

戴乳胶手套操作。

2. 尽量避免使用在酸性条件下呈蓝色或接近蓝色的试剂，否则对本试剂盒的检测结果产生

干扰。

3. 样品中不宜添加 Tween、Triton 和 NP-40 等去垢剂和 DTT、巯基乙醇等影响氧化还原反

应的还原剂。

4. 如果样品测定出来的吸光值在标准曲线范围以外，需把样品适当稀释或浓缩后再进行测

定。

5. 试剂盒 2-8℃保存。

糖原含量说明书

ca ++ mg ++ - atp 酶活性测定说明书