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产品分类：细胞其他

储存条件：4℃,12个月

用途：适合于将核酸(DNA和RNA)转染入真核细胞。

注意事项：无菌溶液,采用配方的阳离子聚合物为主要成分,其高度的分支结构确保了高正离子电荷密度,使得与带有负电荷的外源基因结合更有效,容易被细胞吸收,排斥少,因此能显著提高外源基因的转染效率。根据长时间的实验验证,PolyLea非脂质体转染试剂转染每微克DNA用量少,效率高,成功率高,适合多种类型的细胞系,细胞存活率高,可以广泛用于瞬时转染和稳定转染。

配制与标定的实验原理：

1、用EDTA二钠盐配制EDTA标准溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一种白色晶体粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室温溶解度为0.02g/100g H2O。

2、标定EDTA标准溶液的工作基准试剂，基准试剂的预处理：称量前一般应先用稀盐酸洗去氧化层，然后用水洗净，烘干。

配制步骤：

1、取适量锌片放在100mL烧杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自来水、纯水洗净，烘干、冷却。

2、用直接称量法在干燥小烧杯中准确称取0.15～0.2g Zn，盖好小表面皿。

3、用滴管从烧杯口加入5mL 1:1 盐酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地将溶液转移至250mL容量瓶中，用纯水稀释至标线，摇匀。

实验方法与判定：

1.对照品溶液的稳定性

2.对照品溶液的配制：精密量取脑对照品适量，加无水乙醇制成每1ml含脑1mg的溶液，作为对照品溶液。

3.色谱条件：以交联键合聚乙二醇为固定相的毛细管柱；柱温120℃；进样口温度250℃；检测器温度250℃；分流进样，分流比10:1。理论塔板数按脑计算应不低于10000。

4.实验方法：配制的对照品溶液，一份置冷处保存，一份置室温中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份对照品溶液，三种储备液同时稀释制成每1ml中约含50ug的溶液。照气相色谱法，并依据新对照品的峰面积计算原对照品溶液的含量。记录下来，保证原对照品溶液含量在考察期相对平均偏差不超过2.0%，验证对照品溶液在使用期内稳定可靠。

盐格司琼（标准品） Solamargine质分裂付出蛋白1抗体包装25g

盐关附（标准品） Solasonine脑表皮生长因子跨膜蛋白DNER抗体包装500g

盐环沙星（标准品） Angoroside CDUX3蛋白抗体包装1g

盐环仑特罗（标准品） Toremifene 死亡相关蛋白1抗体包装250mg

盐黄哌酯（标准品） Toremifene 轴丝动力蛋白重链9抗体包装5MG

盐噻/泊杂质J(标准品) Neratinib(HKI-272)磷化动力相关蛋白1抗体包装100ml

盐芬酯(标准品) Methyl ProtodioscinDNA连接4抗体包装1g

盐氧那明（标准品） Gracillin二肽基肽6抗体包装5g

盐金刚烷（标准品） Yohimbine HCl二氢叶还原抗体包装1g

盐金刚乙（标准品） Yohimbine HCl有丝分裂控制样蛋白DIS3L抗体包装5g

盐金霉(标准品) Phentolamine mesilate有丝分裂控制蛋白样DIS3L2抗体包装1g

盐肼屈（标准品） Phentolamine mesilateDOM3Z蛋白抗体包装5g

盐替洛尔（标准品） Vemurafenib,PLX 4032蓬乱蛋白2抗体包装100g

盐克林霉(标准品) Praeruptorin E磷化蓬乱蛋白2抗体包装25g

盐喹那普（标准品） Praeruptorin A转录下调蛋白1抗体包装500g

红色糖多孢菌Saccharopolyspora│erythraea 质量规格：效价测定透明质结合蛋白2试剂盒蒜;(S)-3-(Allylsulp

酿酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 质量规格：含量≥900μg/mg，纯度大于99%，USP32透明质蛋白聚糖连结蛋白1试剂盒桑色;Morin

白蚁梭菌Clostridium│termitidis 质量规格：>98%,标准品透明质试剂盒沙苑子苷;complanatuside
PolyLea非脂质体转染试剂RAP1A/FITC  荧光标记抗Rap1IgG

RAR- Alpha /FITC  荧光标记维受体-α IgG

RAR- Beta /FITC  荧光标记维受体-βIgG

Phospho-Raptor (Ser792) /FITC  荧光标记化mTOR相关调控蛋白IgG

RASSF1A/FITC  荧光标记Ras相关区域家族1AIgG

RASGRF1/FITC  荧光标记Ras特异性鸟核释放因子1IgG

Phospho-RasGRF1 (Ser916)/FITC  荧光标记化Ras特异性鸟核释放因子1IgG

Rb/P5 RB/FITC   荧光标记兔抗人、大、小鼠成视网膜瘤抑癌蛋白IgG

使用方法：

1.  常用筛选浓度

注意：用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线（kill curve），即剂量反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。

一般而言，哺乳动物细胞50-500μg/mL；细菌/植物细胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 杀灭曲线的建立

注意：为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度，可通过建立杀灭曲线（剂量反应曲线）来实现，至少选择5个浓度。

1）  第一天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜；注：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。

2）  根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml，然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。

3）  第二天：替换旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。

4）  接下来每3-4天更换新的含药物培养基。

5）  按照固定的周期（如每2天）进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数（通常是7-10天）内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。

3.   稳定转染细胞的筛选

1）  转染48h后，用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞（直接传代或者稀释后传代）。

注意：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤。则当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到较好的筛选效果，最好将细胞稀释至丰度不超过25%

2）  每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。

3）  筛选7天后观察并评估细胞克隆（集落）的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。

4）   挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。

5）   之后更换正常培养基培养即可。