MTT噻唑兰 细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒

MTT噻唑兰 细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒

参考价: 面议

具体成交价以合同协议为准
2023-02-28 13:44:56
784
属性:
供货周期:一周;货号:40206ES76;应用领域:生物产业;
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产品属性
供货周期
一周
货号
40206ES76
应用领域
生物产业
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翌圣生物科技(上海)股份有限公司

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产品简介

MTT噻唑兰 细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide, MTT),也称作溴化噻唑蓝四氮唑,是一种黄色染料,已经普遍替代传统的台盼蓝染色法或者放射性同位素插入法,用来检测细胞的活力,细胞增殖以及细胞毒性分析。检测原理在于:MTT是一种可接受氢离子的化合物染料,带正电荷,具有细胞膜渗透性

详细介绍

MTT噻唑兰 细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒

产品信息

产品名称

产品编号

规格

储存

价格(元)

MTT Cell Proliferation Assay Kit

MTT噻唑兰 细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒

40206ES76

500T

4避光

229.00

40206ES80

1000T

4避光

419.00

40206ES90

5000T

4避光

1,759.00

产品描述

噻唑兰(Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide, MTT),也称作溴化噻唑蓝四氮唑,是一种黄色染料,已经普遍替代传统的台盼蓝染色法或者放射性同位素插入法,用来检测细胞的活力,细胞增殖以及细胞毒性分析。检测原理在于:MTT是一种可接受氢离子的化合物染料,带正电荷,具有细胞膜渗透性。活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能够将外源进入的MTT还原成为水不溶性的深蓝色MTT-甲臜结晶,而死细胞不具有此功能。甲臜结晶是不能穿透细胞膜,因此沉积在处于增殖且未受损伤的细胞内。甲臜结晶可用DMSO或者酸化的异丙醇溶解出来,酶标仪下测定570 nm的吸光度反映甲臜的生成量。而甲臜的生成量与活细胞数目成正比,用以评估细胞存活状况。

本试剂盒以MTT(高纯度)作为指示剂,在经典操作步骤的基础上,采用*的甲臜溶解液配方,可以直接溶解甲臜沉淀,无需去除原有的培养液。从而避免因去除培养液时甲臜被部分去除而引起的操作误差。具有本底低,灵敏度高,线性范围宽,操作简单等特点。另外,本试剂盒还提供配套的一次性针头过滤器和注射器,为实验带来更多的便利。

产品组分

编号

组分

产品编号/规格

40206ES76500T

40206ES801000T

40206ES905000T

40206-A

MTT粉末

25mg

50mg

250mg

40206-B

MTT溶剂

5ml

10ml

50ml

40206-C

甲臜溶解液

50ml

100ml

100ml×5

40206-D

除菌套装

1

1

1

运输和保存方法

冰袋运输。

收到产品后,取出除菌套装室温保存,其他组分4保存。甲臜溶解液也可以放到室温保存。一年有效。

注意事项

  1. 甲臜溶解液具有腐蚀性和毒性,使用时注意防护。

  2. MTT有致癌性,应小心操作;MTT溶液需要无菌,因其对菌很敏感。MTT溶液不可4℃保存超过1周,因其可能发生降解,导致检测结果错误。

  3. MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力,但不能测定细胞数。在用酶标仪检测结果的时候,为了保证实验结果的线性,MTT吸光度在0-0.7范围内。

  4. 使用微孔板进行检测,如果细胞培养时间比较长,需要注意蒸发的问题。一般情况,由于96孔板周围一圈zui容易蒸发,建议弃用周围一圈的方法,改加PBS,水或者细胞培养液等。也可通过将96孔板放在靠近培养箱内水源的位置,以减缓蒸发现象。

  5. 甲臜溶解液低温或者常温保存可能会产生沉淀,只需37℃水浴使其充分溶解,混匀后即可使用。

  6. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法(以96孔板为例)

细胞生长的培养条件会影响检测效果,因此进行MTT检测时需考虑这些条件,包括:培养时间,传代次数以及生长培养基的成分等。一般情况,48-72h培养时间下,zui初铺板的细胞密度可控制在5×103~5×104/100μl。也可根据细胞大小,增殖速度的快慢来优化zui初的细胞铺板密度以及培养时间。

注意:1)zui终检测的培养液内含有酚红会严重影响检测结果。推荐MTT检测时细胞培养在无酚红环境下。也可以在进行MTT孵育的时候改用无酚红培养液。2)每次实验都要设置空白对照孔(不含细胞)。对于细胞毒性试验,还要设置未经药物处理的细胞孔,此对照孔的吸光度范围一般控制在0.75-1.25之间;每个样品孔建议做三个平行。

A.实验前试剂准备

1. MTT溶液

5ml MTT溶剂直接溶解25mg MTT粉末配制成5mg/ml的工作液,用试剂盒内提供的除菌套装以除去溶液中的细菌,该溶液可4 避光短时间保存(越短越好)。建议溶解后,直接将剩余液体小剂量分装放到-20℃保存,避免反复冻融,6个月稳定。

2 甲臜溶解液MTT终止液)

甲臜溶解液低温或者常温保存可能会产生沉淀,只需37℃水浴使其充分溶解,混匀后即可使用。

BMTT细胞增殖检测

  1. 接种细胞:用含10%胎牛血清(FBS)的培养液配制成单个细胞悬液,调整细胞密度,以每孔5×103~5×104个细胞接种到96孔板,每孔体积100µl,培养板的边缘孔用无菌PBS,水或者培养液填充。设置空白对照孔(不含有细胞)。

  2. 37℃,5% CO2,培养24-72h

  3. 可选:对于贴壁细胞,去除旧的培养液,更换100µl/孔新鲜的培养液(不含酚红);对于悬浮细胞,离心96孔板,去除尽可能多的上清液。然后加入100µl/孔新鲜的培养液(不含酚红)重悬细胞;

  4. 每孔加入10µl MTT工作液(5 mg/ml),加样时尽量勤换枪头,控制加量误差。

  5. 水平摇床上低速混匀1 min后,放入37℃培养箱孵育4h注:对于高密度的细胞(>100,000 cells/)可缩短孵育时间至2h

  6. 对于贴壁细胞,直接吸掉旧的培养液,避免枪尖刮破单细胞层。对于悬浮细胞,离心收集细胞,去除培养液。

  7. 加入100µl/甲臜溶解液,用枪充分混匀后放入37℃培养箱孵育4 h注:更长的孵育时间会降低检测灵敏度。

  8. 孵育结束,放置在酶标仪上摇匀后,选择570nm,测定吸光度。记录结果,比色以空白调零。如果无570nm滤光片,可以使用560-600nm滤光片。

注:对于细胞毒性检测,以未经药物处理细胞的OD值为100%,然后计算药物处理细胞所占的比率(x),公式如下:OD(未处理细胞)/OD(药物处理细胞)=100%/x。然后建立直方图。


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